[发明专利]一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法

说明书

本发明属于卵黄抗体制备技术领域，具体涉及一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法。该方法以黄精多糖、IBD卵黄抗体和柴胡精油作为微球内相，以聚乳酸‑羟基乙酸共聚物作为外相制得。本发明所制成微球特殊的结构有利于将卵黄抗体和黄精多糖递呈给免疫活性细胞，吞噬细胞吞噬微球，并能破坏微球的壳结构，释放卵黄抗体和黄精多糖，中和机体感染的IBD病毒，对于未感染IBD的鸡群起到预防保护作用，并使感染IBD发病的鸡群病情迅速控制。

技术领域

本发明属于卵黄抗体制备技术领域，具体涉及一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法。

背景技术

鸡传染性法氏囊病（IBD）又称鸡传染性腔上囊病，是传染性法氏囊病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，仍然是养鸡业的主要传染病之一，给养鸡业带来了极大的经济损失。预防接种是预防鸡传染性法氏囊病的一种有效措施，通过免疫注射产蛋鸡，从其生产的蛋黄中提取相应的卵黄抗体，用于疾病的预防和治疗，以被广泛用于临床。卵黄抗体具有多方面的优点：（1）大规模饲养、自动收集和分选鸡蛋是常规技术，与哺乳动物相比，鸡的饲养成本更低。（2）用母鸡生产抗体造成的损伤非常少，只需要收集鸡蛋，而不需要采血，因此对动物造成的应激刺激也很少。（3）与哺乳动物血清抗体相比，卵黄只含有IgY一类抗体，因此非常易于通过沉淀技术进行纯化。（4）一旦经过纯化，IgY可以在4℃稳定保存数年。（5）鸡的抗体还可以识别不同于哺乳动物抗体的抗原表位，因此可以形成不同于哺乳动物抗体的抗体库。（6）与IgG相比，IgY不会激活哺乳动物的补体系统或者在胃肠道中与哺乳动物的Fc受体结合导致炎症反应。

虽然卵黄抗体的优点非常突出，但是现在的传染性法氏囊病卵黄抗体还存在一些不足，例如，注射量大，易产生应激反应。针对传染性法氏囊病卵黄抗体的研究一直在不断进行。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种IBD卵黄抗体微球，这种卵黄抗体微球能够有效提高卵黄抗体的免疫效力，减少注射量。

本发明所采用的技术方案为：

一种IBD卵黄抗体微球的制备方法，包括以下步骤：

1）将黄精多糖和IBD卵黄抗体混合搅拌均匀；

2）将步骤1）得的溶液物料加入到柴胡精油中，用均质机均质乳化，作为微球内相；

3）将聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）溶于二氯甲烷中得到溶液作为微球外相，溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的浓度为0.5-2%；

4）将步骤2）溶液与步骤3）溶液以1:3-10的比例混合得到混合液，向混合液中加入表面活性剂PEG400均质，以10000 r/min速率进行高剪切乳化，增加内相和外相的亲和性，使内相有效成分被包封于PLGA外相内；

5）步骤4）的混合液置于磁力搅拌器中，在转速250 r/min的室温条件不断搅拌得到微球，使乳滴中的二氯甲烷完全挥发，离心得到微球，微球用蒸馏水洗涤3次除去多余的有机溶剂得到IBD卵黄抗体微球。

所述步骤2）中每10ml柴胡精油中含有3-7g黄精多糖和5ml IBD卵黄抗体。

所述步骤5）制得的IBD卵黄抗体微球的粒径为25-1000nm。

本发明中的柴胡精油也叫柴胡挥发油，制备时，采用水蒸气蒸馏法对粉碎的柴胡进行蒸馏提取，收集蒸馏液，取上层挥发油。

本发明中使用的IBD卵黄抗体采用以下方法制得：

a、抗原制备：采集具有典型IBD病理变化的法氏囊和脾脏，剪碎后高速搅拌匀浆，离心取上清液，加入0.3%甲醛，37℃温箱中灭活48小时；