[发明专利]一种猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202111541904.1 | 申请日： | 2021-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN114272368A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 杨鑫;刘鑫;李子鸣;李伊 | 申请（专利权）人： | 成都博宠生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/245 | 分类号： | A61K39/245;A61K39/12;A61P31/22;A61P31/14;C12N15/861;C12R1/93 |
| 代理公司： | 成都东唐智宏专利代理事务所(普通合伙) 51261 | 代理人： | 罗言刚 |
| 地址： | 610000 四川省成都市中国(四川)*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 猪瘟 狂犬 二联 疫苗 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗，其特征在于，由猪伪狂犬病病毒gB抗原、猪瘟病毒E2抗原插入至复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体上制备而得，其中猪伪狂犬病病毒gB抗原基因序列为SEQ ID No.1，猪瘟病毒E2抗原基因序列如SEQ ID No.2所示。
2.根据权利要求1所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗，其特征在于，含量为108.0VP/头份。
3.如权利要求1所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、制备目的基因：设计引物，通过PCR法扩增出猪瘟病毒抗原蛋白E2基因与猪伪狂犬病病毒抗原蛋白gB基因；
(2)、构建重组复制缺陷型黑猩猩腺病毒质粒：将所述的猪瘟病毒抗原蛋白E2基因与猪伪狂犬病病毒蛋白gB基因插入到穿梭载体特异性启动子和终止子之间，构建成含有融合E2和gB基因的重组复制缺陷型黑猩猩腺病毒穿梭载体pShuttle-E2/gB；将重组复制缺陷型黑猩猩腺病毒穿梭载体pShuttle-E2/gB线性酶切插入到复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体，构建复制缺陷型黑猩猩腺病毒质粒；
(3)、制备重组复制缺陷型黑猩猩腺病毒液：将复制缺陷型黑猩猩腺病毒质粒转染HEK293细胞，获得基因组结构均一的重组腺病毒，收集重组腺病毒病毒感染的病变细胞，连同上清液冻存，根据需要制备成所需病毒液。
4.根据权利要求1所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗的制备方法，其特征在于，步骤(1)采用引物扩增法制备，其中猪瘟病毒抗原蛋白E2的上游引物:5'-TAGGCTTCTATCTAGTCTGCGCAATA-3'，
下游引物:5'-GAATGAAGATTATGCTATGGTACGTAG-3'。
5.根据权利要求3所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗的制备方法，其特征在于，猪伪狂犬病病毒蛋白gB的上游引物为:5’-CCAGTCGCAGGCCACCGTGAGTG-3'，
下游引物为:5’-ATCGCGTGCTCTTCATGGAGATC-3'。
6.根据权利要求4所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗，其特征在于，步骤(2)所述的穿梭载体的启动子为CMV，终止子为polyA。
7.一种如权利要求1所述的猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗在用于制备防疫猪瘟和伪狂犬病毒药品或药盒中的应用。
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