[发明专利]一种人参来源的抗血管生成及抗肿瘤活性肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人参来源的抗血管生成及抗肿瘤活性肽，其特征在于，所述活性肽的氨基酸序列为Leu-Asp-Asp-Pro-Val-Phe-Arg-Pro。

2.一种权利要求1所述的活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备人参低聚肽：将人参样品粗粉碎处理后，加入15～20倍质量体积的水制成匀浆液置于酶解罐中，向酶解罐中加入人参质量0.5%～1.0%的纤维素酶，在45～50℃下酶解1～2小时，酶反应pH值控制在5.0～6.0；向酶解罐中加入人参蛋白质质量3%～5%的复合蛋白酶，在50～55℃下酶解3～4小时，酶反应pH值控制在9.0～10.0，所述复合蛋白酶的质量配比为：碱性蛋白酶:菠萝蛋白酶:风味蛋白酶=（4~6）:（2~4）:（2~4）；酶解结束后升温至80～90℃灭酶10～15分钟，得到人参酶解液，将人参酶解液以6000～8000转/分钟离心8～10分钟，去除颗粒状物质，清液采用截留分子量为3000Da的膜进行分离，过膜液喷雾干燥得人参低聚肽粉；

S2、将人参低聚肽分离纯化为小分子活性肽：将人参低聚肽粉加水溶解，配制成浓度为100mg/mL的溶液，采用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱法进行分离纯化，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱内径为3.0cm，柱长100cm；流动相为35%甲醇，流速为0.4～0.6mL/min，洗脱液280nm测定吸光度，根据吸光度值收集所需峰；采用高效液相色谱再纯化，收集保留时间在17分钟的色谱峰，浓缩后冷冻干燥得小分子活性肽；色谱条件如下：C18色谱柱，C18色谱柱内径为4.6mm，柱长250mm，粒度5µm；流动相A为含体积百分数 0.05%～0.08%三氟乙酸水，流动相B为乙腈，梯度洗脱条件为：0～15 min，5%B；15～20 min，5%～15%B；20～30 min，15%B～25%B；30～40 min，25%B～40%B；流速为0.8～1.0mL/min，检测波长为280nm；

S3、活性肽纯度及氨基酸序列测定：收集的小分子肽经液相色谱检测为单一峰，利用高效液相色谱-质谱测定结构，其氨基酸序列为：Leu-Asp-Asp-Pro-Val-Phe-Arg-Pro，其分子量为958Da。

3.一种权利要求1所述的活性肽在制备抗血管生或抗肺癌药物的应用。