[发明专利]一种兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

制备甲基营养型芽孢杆菌菌粉和枯草芽孢杆菌菌粉；

制备淡紫拟青霉菌粉；

将制备的甲基营养型芽孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌粉和枯草芽孢杆菌菌粉按如下重量份数复配：甲基营养型芽孢杆菌菌粉3～8份，淡紫拟青霉菌粉1份，枯草芽孢杆菌菌粉2～5份，混匀后得到兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，制备甲基营养型芽孢杆菌菌粉和枯草芽孢杆菌菌粉包括如下步骤：

从-80℃条件下取出采用甘油保存的甲基营养型芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌，按照3‰～5‰的比例分别接种到液体LB培养基中，在35℃～38℃条件下振荡培养24h～48h后得到甲基营养型芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌的种子液；

将活化的种子液按照5％～10％的比例分别接种到一级培养基中进行培养，得到一级种子液，再按照体积60％～70％的比例将一级种子液分别接种到二级培养基中进行培养，得到二级种子液；

将二级种子液分别导入碟式离心机中，在转速6000r/min下离心15min，离心后排除上层菌悬液，得到两种菌种浓缩液；

将两种菌种浓缩液分别倒入搅拌机中并加入10％～13％的辅料，通过0.9Pa的压力将菌种浓缩液压至旋转喷头，并使喷头保持在转速为20000r/min下喷雾，同时在干燥塔中通入150℃、4000m³/h的热风进行干燥，经喷雾干燥后制得两种有效活菌数均不小于1×10¹¹CFU/g的芽孢杆菌微生物菌粉。

3.根据权利要求2所述的兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，一级培养基的组分为：黄豆粉3～7g/L，玉米粉3～7g/L，蔗糖8～16g/L，蛋白胨5～15g/L，鱼粉5～10g/L，碳酸钙2～6g/L，磷酸二氢钾0.2～1.4g/L，硫酸锰0.5～1.5g/L，硫酸铵1～1.5g/L；

活化的种子液在一级培养基中的培养条件为：培养温度35℃～37℃，培养时间17h～20h，有效活菌数不小于1×10⁸CFU/mL。

4.根据权利要求2所述的兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，二级培养基的组分为：黄豆粉10～18g/L，玉米粉2～6g/L，蔗糖2～4g/L，蛋白胨1～3g/L，鱼粉1～3g/L，碳酸钙4～8g/L，磷酸二氢钾0.1～0.5g/L，硫酸镁0.1～0.5g/L，硫酸锰0.1～0.3g/L，磷酸氢二钾0.1～0.5g/L，氯化钠0.1～0.5g/L，硫酸铵0.2～0.8g/L，氢氧化钠0.1～0.4g/L；

一级种子液在二级培养基中的培养条件为：培养温度35℃～37℃，供氧气量15m³/h，培养时间23h～25h，有效活菌数不小于1×10⁹CFU/mL。

5.根据权利要求2所述的兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，辅料包括以下重量份的组分：硅藻土55～65份，碳酸钙15～25份，淀粉15～25份。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的兼防根结线虫病和根肿病的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，制备淡紫拟青霉菌粉包括如下步骤：

从菌种库中取出采用滤纸保藏法保存的淡紫拟青霉菌，接种到PDA液体培养基中，在20℃～28℃条件下振荡培养72h～120h后得到种子液；

将活化的菌种按照10％～20％的比例接种到一级液体培养基中，得到一级种子液，再按照60％～70％的比例将一级种子液接种到二级液体培养基中，得到二级种子培养液；

将二级种子培养液接种到固体培养基中进行培养，收集淡紫拟青霉孢子粉，得到淡紫拟青霉菌粉。