[发明专利]紫色叶水稻两系不育系及其选育方法与应用

权利要求书

1.一种紫色叶水稻两系不育系，其特征在于，所述紫色叶水稻两系不育系由水稻紫色叶性状基因DFR和plr4的分子标记辅助选育。

2.根据权利要求1所述的紫色叶水稻两系不育系，其特征在于，所述水稻紫色叶性状基因DFR的分子标记引物序列为：

DFR-Fc GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGAGCTGGCGGGGTC；

DFR-Fa GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCTGGAGCTGGCGGGGTA；

DFR-R2 TCCTCGCCCAGGTCGG。

3.根据权利要求1所述的紫色叶水稻两系不育系，其特征在于，所述水稻紫色叶性状基因plr4的分子标记引物序列为：

plr4LDF TGTCGCAATTTCTTACAATC；

plr4LDR CGTTACGCCAGACTACTACC。

4.如权利要求1所述的紫色叶水稻两系不育系的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以紫叶水稻材料先红B为父本与细长粒型的绿叶水稻泰丰B杂交得F₁代种子；

(2)种植步骤(1)所得的F₁代种子，植株全部为绿叶，与绿叶两系不育系08S杂交得复交F₁代种子；

(3)种植步骤(2)所得的复交F₁代种子，进行水稻紫色叶性状基因DFR、plr4的分子标记跟踪，选择其中的细长粒可育单株与绿叶两系不育系08S杂交得BC₁F₁代种子；

(4)种植步骤(3)所得的BC₁F₁代种子，进行DFR、plr4分子标记跟踪，选择其中的细长粒可育单株与绿叶两系不育系材料08S回交获得BC₂F₁代种子；

(5)种植步骤(4)所得的BC₂F₁代种子，选择农艺性状优良的细长粒紫叶不育单株，逐年种植自交株系至BC₂F₈；

(6)种植步骤(5)所得的BC₂F₈代种子，选择紫色叶、株叶型好、柱头外露率高、米质优的植株即为紫色叶两系不育系材料。

5.根据权利要求4所述的紫色叶水稻两系不育系的选育方法，其特征在于，所述步骤(3)中水稻紫色叶性状基因DFR的分子标记包括以下步骤：

S1、提取水稻植株的基因组DNA；

S2、PCR扩增：将权利要求2所述的3条引物DFR-Fc、DFR-Fa和DFR-R2及两条通用荧光引物：#1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT；#2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT同时加入到PCR反应体系中，对水稻植株中的DFR基因进行扩增；

S3、将PCR产物在酶标仪中进行荧光信号值的快速读取，通过SNP decoder工具进行基因分型，荧光扫描获得FAM荧光信号的是紫叶相关的DFR等位基因类型材料，扫描获得HEX荧光信号的是绿叶相关的dfr等位基因类型材料，扫描结果为红色信号，则表示该样品为杂合状态。

6.根据权利要求4所述的紫色叶水稻两系不育系的选育方法，其特征在于，所述步骤(3)中水稻紫色叶性状基因plr4的分子标记包括以下步骤：

R1、提取水稻植株的基因组DNA；

R2、PCR扩增：将权利要求3所述的2条引物plr4LDF和plr4LDR同时加入到PCR反应体系中，对所述的水稻植株中的plr4基因进行扩增；

R3、将PCR产物在包含荧光染料GelRed的琼脂糖凝胶上进行电泳检测，读取条带，条带210bp的是紫叶相关的plr4等位基因类型材料，条带135bp的是绿叶相关的plr4等位基因类型材料，两条条带都存在则表示该样品为杂合状态。