[发明专利]一种获取无菌小鼠的方法

权利要求书

1.一种获取无菌小鼠的方法，其特征在于，其包括：处死超排后的雌鼠和雄鼠，获得输卵管和附睾，取出卵子和精子体外受精后将受精卵进行清洗平衡以获得可用胚胎，通过无菌传递窗将胚胎和受体假孕雌鼠传入无菌隔离包内，吸取胚胎使其进入所述受体假孕雌鼠的输卵管，然后将携带胚胎的所述受体假孕雌鼠传入饲养包进行饲养。

2.根据权利要求1所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，选择雌鼠进行超排获得卵子，选择雄鼠获得精子然后通过体外授精的方法获得受精卵；在显微镜下用胚胎体外操作液和含双抗的DPBS溶液清洗受精卵；清洗后将受精卵移入胚胎培养液平衡。

3.根据权利要求2所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述胚胎体外操作液为M2培养液、CZB培养液或KSOM培养液，所述胚胎培养液为M16培养液。

4.根据权利要求2所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述清洗受精卵是指：先将由胚胎体外操作液冲出的受精卵在含有双抗的DPBS中清洗，然后再次置于新的胚胎体外操作液中清洗；

优选地，在新的胚胎体外操作液中重复清洗2-3次。

5.根据权利要求2所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述平衡的条件为：37℃±0.5℃、5％±0.5％CO₂的培养箱中进行。

6.根据权利要求5所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述平衡的时间为30min-600min。

7.根据权利要求5所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述平衡后，对所述胚胎培养液进行预热，并在生物安全柜中将所述胚胎转移至冻存管中进行密封，用于后续传递至无菌隔离包中。

8.根据权利要求1所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，采用手持气控方式吸取胚胎使其进入所述受体假孕雌鼠的输卵管内进行胚胎的着床发育。

9.根据权利要求8所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述胚胎为原核-囊胚细胞期的胚胎。

10.根据权利要求1所述的获取无菌小鼠的方法，其特征在于，所述方法还包括对培养胚胎的试剂、无菌隔离包、转移胚胎的试剂、饲养包进行微生物采样检测。