[发明专利]一种托品酮的合成方法

权利要求书

1.一种托品酮的合成方法，其特征在于：所述的方法联用能产生4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的工程菌株与能催化4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸转化成托品酮的单胺氧化酶合成托品酮；所述的单胺氧化酶为氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的托品酮的合成方法，其特征在于：所述的能产生4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的工程菌株含有合成4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的相关基因。

3.根据权利要求1所述的托品酮的合成方法，其特征在于：所述的能产生4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的工程菌株通过将合成4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的相关基因中的一个或多个导入到宿主菌株中获得。

4.根据权利要求3所述的托品酮的合成方法，其特征在于：所述的宿主菌株为大肠杆菌或酵母。

5.根据权利要求2所述的托品酮的合成方法，其特征在于：所述的合成4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸的相关基因包括：鸟氨酸脱羧酶编码基因，N-甲基转移酶编码基因，二胺氧化酶编码基因，III型聚酮合酶编码基因。

6.根据权利要求1所述的托品酮的合成方法，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的单胺氧化酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求1-6任一项所述的托品酮的合成方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将能产生4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸工程菌株接种到液体培养基中进行发酵培养，离心收集发酵上清液，冻干浓缩发酵上清液；

(2)将单胺氧化酶、以及FAD和/或过氧化物酶加入到浓缩的发酵上清液中，通过单胺氧化酶转化4-(1-甲基-2-吡咯烷基)-3-氧代丁酸合成托品酮。

8.根据权利要求7所述的托品酮的合成方法，其特征在于：步骤(1)中，发酵上清液冻干浓缩至原体积的1/40～1/10。

9.根据权利要求7所述的托品酮的合成方法，其特征在于：步骤(2)中，单胺氧化酶的终浓度为5～200μg/mL，FAD的终浓度为0.1～2mM，过氧化物酶的终浓度为5～200μg/mL。

10.根据权利要求7所述的托品酮的合成方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的单胺氧化酶为含有单胺氧化酶编码基因的异源表达菌株被诱导表达积累足够的单胺氧化酶后，收集菌体，用缓冲液重悬，破碎菌体后冻干得到。