[发明专利]一种黄柏的鉴别方法及其应用

权利要求书

1.一种黄柏的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将供试样品粉碎后与提取溶剂混合，进行提取处理得到样品提取液，将所述样品提取液经过滤后得到样品液；

(2)制备含有第一对照物的第一对照液，将步骤(1)中的所述样品液和所述第一对照液分别进行液相色谱分析得到样品液相色谱和第一对照液相色谱，将所述样品液相色谱和所述第一对照液相色谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行匹配，生成供试样品的对照图谱，然后经图谱数据分析从所述供试样品中鉴别出黄柏样品I；

(3)制备含有第二对照物的第二对照液，将步骤(1)中的所述样品液和所述第二对照液分别进行薄层层析，通过紫外灯下观察薄层层析的条带，从所述供试样品中鉴别出黄柏样品II；

(4)将步骤(2)得到的所述黄柏样品I与步骤(3)得到的所述黄柏样品II进行比对验证以鉴别出黄柏。

2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中所述粉碎的过程包括：将所述供试样品粉碎后过65目筛得到粒径小于65目的样品颗粒。

3.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取溶剂为含有盐酸的甲醇溶液；

优选地，所述提取溶剂中盐酸与甲醇的质量比为0.5-2：100。

4.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取处理的过程包括：将所述混合得到的混合液进行超声处理25-35min后，进行固液分离；

优选地，所述过滤采用膜过滤，所述膜过滤的滤膜孔径为0.2-0.45μm。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中，所述第一对照物含有盐酸小檗碱、木兰花碱和盐酸巴马汀；

优选地，所述第一对照液中盐酸小檗碱的浓度为0.005-2mg/mL、木兰花碱的浓度为0.005-0.5mg/mL、盐酸巴马汀的浓度为0.005-0.5mg/mL；

优选地，所述第一对照液的溶剂为甲醇。

6.根据权利要求1至4中任意一项所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中所述液相色谱分析的条件包括：色谱柱采用Waters Atlantis T3，以乙腈为流动相A、以含有磷酸和三乙胺的水溶液作为流动相B，在流动相A与流动相B体积比为0.1-19：1的范围内进行梯度洗脱；柱温为15-25℃，流速为0.6-1mL/min，波长为200-250nm，进样量为1-3μL；

优选地，所述流动相B中磷酸的含量为0.2-0.5体积％，三乙胺的含量为0.2-0.5体积％。

7.根据权利要求1至4中任意一项所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中所述图谱数据分析的过程包括：将所述供试样品的对照图谱数据采用主成分分析和/或正交偏最小二乘判别分析进行处理。

8.根据权利要求1至4中任意一项所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中，所述第二对照物含有盐酸巴马汀和/或盐酸小檗碱；

优选地，所述第二对照液中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的浓度分别为0.1-1mg/mL；

优选地，所述第二对照液的溶剂为含有盐酸的甲醇溶液，所述盐酸与甲醇的质量比为0.5-2：100。

9.根据权利要求1至4中任意一项所述的鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中所述薄层层析色谱的过程包括：将所述样品液和所述第二对照液分别在硅胶薄层板上点样，进行展开、取出、干燥后，利用显色剂进行加热显色；

优选地，所述点样的点样量为0.5-2μL，所述展开的展开剂为正丁醇-乙酸-水溶液，所述显色剂为含有浓硫酸的乙醇溶液；

优选地，所述展开剂中正丁醇、乙酸和水的体积比为3-4：0.2-0.7：1，所述显色剂中浓硫酸的含量为3-8体积％。

10.权利要求1至9中任意一项所述的鉴别方法在区分黄柏及其易混淆品、黄柏质量控制以及黄柏真伪鉴定中的应用，其中，所述黄柏为川黄柏和/或关黄柏。