[发明专利]用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物及试剂盒，相关FGFR3基因变异位点为第一位点和第二位点，第一位点为NM_000142.5:exon10:c.1138GA:p.Gly380Arg，第二位点为NM_000142.5:exon10:c.1138GC:p.Gly380Arg；第一位点和第二位点的上游引物的核苷酸序列均如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列均如SEQ ID NO.2所示；第一位点的野生探针和第二位点的野生探针的核苷酸序列均如SEQ ID NO.3所示，第一位点的突变探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；第二位点的突变探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。准确度较高，假阳性率较低，成本低廉，不需要高端仪器，结果判读简单，适于进行普遍筛查，降低软骨发育不全患儿的出生率。

技术领域

本发明属于软骨发育不全诊断技术领域，具体涉及一种用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物及试剂盒。

背景技术

软骨发育不全(Achondroplasia，ACH)是最常见的骨发育不良，发病率为1/77000-1/15000，属于常染色体显性遗传病，外显率为100％。几乎所有软骨发育不全病例都由FGFR3基因的两种致病性变异引起，即c.1138GA(约占98％)和c.1138GC(约占1％)，因此检测这两种变异可辅助诊断99％的软骨发育不全患者。这两种变异导致FGFR3跨膜结构域第380位的甘氨酸改变为精氨酸(G380R)，使FGFR3受体永久激活，抑制软骨细胞增殖，最终导致软骨内骨形成受损、生长受限、骨缩短和其他骨骼异常。约80％-90％的软骨发育不全病例由新发(de novo)致病性变异所引起，其发生与父亲年龄较大有关，另外10％-20％是由家族遗传所致。

软骨发育不全患者大多数智力正常并可以正常的生活，患者在婴儿期的死亡率约为2％-5％，主要是由于枕骨大孔动脉挤压继而引起的中枢性窒息。大多数患者会伴有各种并发症，给生活和精神带来巨大负担。软骨发育不全患者终生均可能发生脑积水，患者通常存在胸椎后凸，在成年期椎弓根缩短而导致椎管狭窄及椎间盘突出，膝内翻，伴有全身的关节松弛、肌张力减退、上气道堵塞和睡眠呼吸暂停。目前的临床干预方法主要是针对并发症，减轻并发症产生的继发性损害。及早控制和预防并发症，对提高患者生活质量有较大帮助。

目前临床上常用激素治疗缓解软骨发育不全患者的一些并发症。2020年11月，美国FDA接受C型利钠肽类似物Vosoritide的新药申请(NDA)，用于治疗儿童软骨发育不全。一项3期研究结果表明，Vosoritide能有效促进软骨发育不全儿童的骨骼生长，而且一年后仍然有效。如果获得批准，Vosoritide将成为第一个治疗软骨发育不全症的药物。

基因检测是诊断软骨发育不全的金标准。软骨发育不全临床表现及X线表现时常难以与软骨发育低下(hypochondroplasia，HCH)、假性软骨发育不全(pseudoachondroplasia,PSACH)区分，容易造成误诊。因此，可通过检测FGFR3基因1138位点变异存在与否鉴别诊断软骨发育不全及类似遗传性侏儒症。同时，软骨发育不全是一种在胚胎时期就开始对发育产生影响的常染色体显性遗传病，患者在骨骼系统上有明显的发育缺陷，出生后无法根治身材矮小等发育异常，因此进行产前诊断预防该类患儿的出生显得尤为重要。产前筛查和诊断方法主要是通过胎儿超声来筛查出长骨(即肱骨和股骨)短小的软骨发育不全可疑胎儿，再对筛查出的软骨发育不全可疑胎儿和宫内生长迟缓胎儿(IUGR)进行染色体检查和FGFR3基因1138位点变异检测。但目前临床使用的Sanger测序法复杂费时，难以满足实际需求，临床上缺乏一种快速、简便、准确的检测软骨发育不全的方法。

发明内容

本发明针对目前临床使用的Sanger测序法复杂费时，难以满足实际需求的问题，本发明提供一种用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物及试剂盒。