[发明专利]用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针，其特征在于：所述荧光探针化学结构式为：

其中，n＝2、3、4、5、6；X1，X2均为氨基酸。

2.根据权利要求1所述的用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针，其特征在于：所述X1为亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸中的一种。

3.根据权利要求1所述的用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针，其特征在于：所述X2为丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸中的一种。

4.根据权利要求1所述的用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针的制备方法，其特征在于：将三苯胺AIE分子标记到多肽链上制备成用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针。

5.根据权利要求4所述的用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

Fmoc保护的单体用碱性溶剂去除氨基的保护基团，然后通过活化剂活化下一个氨基酸的羧基，活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键；按上述反应反复循环直到合成完成，之后将多肽从树脂上洗脱下来，采用脱保护剂洗脱掉碳端氨基酸的保护基团，连接AIE分子。

6.根据权利要求1所述的AIEE荧光探针的3CL蛋白酶检测方法，其特征在于：包括以下步骤：将优化浓度后的3CL蛋白酶溶液与探针溶液孵育，并加入Zn²⁺溶液，然后采用350nm波长光激发，得到400nm到600nm之间的发射光谱。

7.根据权利要求1所述的AIEE荧光探针的3CL蛋白酶抑制剂筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：

a.将优化浓度后的3CL蛋白酶溶液与探针溶液孵育，并加入Zn²⁺溶液，用350nm波长光激发，得到400nm到600nm之间的发射光谱并计算出该荧光发射光谱的积分面积，即为不加抑制剂时的荧光光谱积分面积；

b.将优化浓度后的3CL蛋白酶溶液先与抑制剂于反应缓冲液中预孵育，然后加入优化浓度的探针溶液和Zn²⁺溶液，用350nm波长光激发，得到400nm到600nm之间的荧光发射光谱，计算出该荧光发射光谱的积分面积，即为加抑制剂后的荧光光谱积分面积；

c.将步骤b中不同浓度的抑制剂溶液直接与探针溶液和Zn²⁺溶液孵育，用350nm波长光激发，得到400nm到600nm之间的荧光发射光谱，计算出该荧光发射光谱的积分面积，即为背景荧光光谱积分面积；

d.将步骤a、b、c中的光谱积分面积代入以下公式：

抑制率＝(不加抑制剂时的光谱积分面积-加抑制剂后的光谱积分面积)/(不加抑制剂时的光谱积分面积-背景光谱积分面积)*100％，计算得到抑制剂对3CL蛋白酶的抑制率，从而进行筛选和IC₅₀值的确定。

8.根据权利要求1所述的用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针的应用，其特征在于：将用于3CL蛋白酶检测及抑制剂筛选的锌离子诱导AIEE荧光探针应用于细胞荧光成像。