[发明专利]一种诱导红甜菜胚性愈伤组织的方法

说明书

一种诱导红甜菜胚性愈伤组织的方法，属于愈伤组织诱导技术领域。为了获得红甜菜胚性愈伤组织并建立其再生体系，本发明选用红甜菜资源357，经种子处理及萌发后获得无菌苗，采集无菌苗外植体，接种于含有0.25mg/L 6‑BA的愈伤组织培养基，培养7～8周后获得胚性愈伤组织。本发明所述的诱导红甜菜愈伤组织的方法为建立甜菜植株再生体系提供细胞学理论基础，也为更好的利用基因工程手段提供高质高产的新品种奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种诱导红甜菜胚性愈伤组织的方法，属于愈伤组织诱导技术领域。

技术背景

甜菜是世界上重要的糖料作物之一，也是我国第二大糖料作物，在中国东北、西北以及华北地区有较大面积的种植，是中国北方重要的经济作物和糖料作物。不同类型的甜菜也具有不同的价值，其中红甜菜营养价值丰富，其富含天然红色维生素B12及铁质，具有补血的作用，并且其富含的烟酸可参与血红蛋白的合成，使血红蛋白的含量增加，进而提高携氧能力。此外，红甜菜加工的副产物还可用于生产酒精、甲醇、丁醇等化工产品。同时，红甜菜中的重要次生代谢产物甜菜红色素还具有解毒和抗氧化活性，有较强的医疗和保健价值。

然而，由于甜菜的栽培驯化时间较短，遗传背景狭窄，资源贫乏，自交高度不亲和性，往往使得优良单株基因型很容易丢失，给优良品种选育材料的繁殖和保存带来了不少的困难。且随着分子生物学和植物转基因技术的快速发展，当前利用基因工程技术提高作物品质，培育新品种是作物育种研究的热点之一，而基因工程技术又需要依托组织培养技术的支持，通过诱导植物胚性愈伤组织，将带有目的基因的质粒导入胚性愈伤组织中，利用胚性愈伤组织的再分化能力分化形成完整植株，建立完整的再生体系，形成转基因植株。因此，甜菜胚性愈伤组织的培养及其再生体系的建立就为甜菜基因工程以及培育新的优良品种提供了新途径。

根据组织学观察、外观特征及其再生性、再生方式等，可将愈伤组织分成两大类：胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织。一般胚性愈伤组织质地较坚实，颜色有乳白色或黄色，表面具球形颗粒，其生长缓慢；从细胞学角度来看，胚性愈伤组织由等直径细胞组成，细胞较小，原生质浓厚，无液泡，常富含淀粉粒，核大，分裂活性强，内容物丰富，具有鱼雷胚、心型胚的典型特征，而分化能力差的非胚性愈伤则相反，组织结构疏松，细胞相对巨大，内含一大液泡，几乎无细胞器，呈水浸褐化状。为了获得分化能力更强的愈伤组织，应选择诱导胚性愈伤组织。然而存在诸多因素会影响胚性愈伤组织的形成，因此，亟需寻求一种红甜菜胚性愈伤组织的诱导方法。

发明内容

本发明为了获得红甜菜胚性愈伤组织并建立其再生体系，提供了一种诱导红甜菜胚性愈伤组织的方法，该方法包括如下步骤：

S1、种子处理及无菌苗的获得：挑取饱满的红甜菜种子，去壳，消毒，用蒸馏水反复冲洗后接种于MS基础培养基上使种子萌发，18～22天后获得红甜菜无菌苗，采集红甜菜无菌苗外植体；

S2、愈伤组织的诱导：向MS基础培养基中添加0.25mg/L 6-BA，作为愈伤组织的诱导培养基，将S1所述无菌苗外植体接种于愈伤组织培养基，培养时间为7～8周。

优选地，20天后获得红甜菜无菌苗。

进一步地限定，所述红甜菜的品种为红甜菜资源357。

进一步地限定，S1所述消毒为先用75％的酒精消毒2min，再用12％的次氯酸钠消毒5min。

进一步地限定，S1和S2所述的MS基础培养基的组成为3％蔗糖，0.8％琼脂，余量为水。

进一步地限定，S1所述外植体取自无菌苗的叶片、叶柄和生长点。

优选地，S1所述外植体取自无菌苗的叶柄。

进一步地限定，S2所述培养温度为22-24℃。

本发明的有益效果：