[发明专利]一种用于检测纯种西伯利亚鲟核基因的引物探针组合物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测纯种西伯利亚鲟核基因的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括用于检测西伯利亚鲟核基因BGS的引物探针I和用于检测西伯利亚鲟核基因微卫星SX37的引物Ⅱ；

所述引物探针I包括SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子组成的引物对，以及SEQ ID No.3和SEQ ID NO.4所示的TaqMan-MGB探针；

所述引物Ⅱ包括SEQ ID NO.5所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.6所示的单链DNA分子组成的引物对。

2.根据权利要求1所述的用于检测纯种西伯利亚鲟核基因的引物探针组合物，其特征在于，所述TaqMan-MGB探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有MGB无荧光淬灭基团。

3.权利要求1或2所述的用于检测纯种西伯利亚鲟核基因的引物探针组合物在西伯利亚鲟的种质鉴定或西伯利亚鲟源性成分检测中的应用。

4.权利要求1或2所述的用于检测纯种西伯利亚鲟核基因的引物探针组合物在制备检测西伯利亚鲟核基因的试剂或试剂盒中的应用。

5.一种用于检测西伯利亚鲟核基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的有效成分为权利要求1或2所述的引物探针组合物。

6.根据权利要求5所述的用于检测西伯利亚鲟核基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光定量PCR反应的试剂。

7.一种鉴定纯种西伯利亚鲟的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测样品中的DNA；

2)以步骤1)提取的DNA为模板，利用权利要求1或2所述的引物探针组合物进行两步骤荧光PCR扩增反应，获得扩增曲线、Ct值，以及熔解曲线；

3)根据扩增曲线、Ct值和熔解曲线进行综合结果判定，具体判断方法为：

检测BGS核基因时，应用两个检测通道读取数据，如仅FAM检测通道530nm出现特征性扩增曲线，且Cp/Ct值≤30.0，而ROX检测通道601nm无Cp/Ct值并且无扩增曲线，可判定样品来源动物的父本和母本核基因均来自西伯利亚鲟、俄罗斯鲟或施氏鲟，即来源动物为西伯利亚鲟、俄罗斯鲟或施氏鲟纯种或三者之间的杂交种；

若仅出现ROX检测通道单阳性或双检测通道阳性，则可判定样品来源动物的父本或母本核基因至少有一方不来自西伯利亚鲟、俄罗斯鲟或施氏鲟，即来源动物不可能是纯种西伯利亚鲟；

将上述出现FAM检测通道单阳性的样品再进行微卫星SX37核基因检测，若样品的熔解曲线在78℃±0.5℃出现特征性峰图，可判定样品来源动物的父本或母本核基因至少有一方来自施氏鲟或俄罗斯鲟，即来源动物不是纯种西伯利亚鲟；若样品的熔解曲线在78℃±0.5℃不出现特征性峰图，可判定样品核基因均来自西伯利亚鲟，即来源动物是纯种西伯利亚鲟。

8.根据权利要求7所述的鉴定纯种西伯利亚鲟的方法，其特征在于，所述待测样品为鲟鱼的鳍条组织及含有鲟鱼源性成分的食品或化妆品。