[发明专利]一株具有润肠通便功效的发酵乳杆菌TY-G04及其应用

说明书

一株具有润肠通便功效的发酵乳杆菌TY‑G04(Lactobacillus fermentum TY‑G04)，该菌株经中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期为2021年11月8日，保藏编号为CGMCC No.23752。通过动物验证实验确定本发明公布的具有润肠通便功效的发酵乳杆菌TY‑G04能够改善便秘，且改善的方式是通过产生代谢产物乙酸、丁酸促进5‑HT的释放，5‑HT则通过刺激胃肠调节肽的分泌为大脑神经元传递信号，从而触发肠道蠕动反射，产生便意并加速肠道蠕动，最终达到改善便秘的功效。本发明初步探索了便秘患者“脑‑肠轴”间的相互作用，为当下便秘的诊断和治疗提供更为广阔的思路。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株具有润肠通便功效的发酵乳杆菌TY-G04及其应用。

背景技术

肠道是保护人体健康的第一道防线，也是人体的清道夫。人体99％的营养物质被肠道吸收，80％以上的毒素通过肠道排出体外，若肠道出现疾病，则会对人体健康造成一定的影响。

便秘是最常见的肠道疾病之一，其主要表现为排便次数减少，排便困难，粪质硬结，量少，排便时肛门不适、坠胀和便血等。如果人体长期处于便秘状态，则体内毒素就不能及时清除，这会造成体内毒素被肠道重复吸收利用并进入血液循环，导致对体内器官造成危害、病变，甚至癌变。临床上通常使用药物或手术进来治疗便秘，药物治疗虽然有一定的作用，但是长期用药身体可能会产生抗药性、依赖性和其他并发症，例如药物依赖、恶心和严重腹泻；手术治疗立竿见影，但治标不治本，平时不注意很容易复发。可见，目前针对便秘症状，临床治疗仍然存在治疗难度大、易反复等特点。

引起便秘的常见原因是肠道菌群失调，补充乳酸菌来调节肠道微生态是治疗便秘的有效措施之一，乳酸菌进入人体后能够改变肠道环境并影响肠道的运动和肠道激素的分泌，从而为便秘患者带来益处；而乳酸菌发挥有益功效的前提是能活着到达肠道并能成功定植在肠道。因此，本领域亟需寻找一种能活着到达肠道并能成功定植在肠道的乳酸菌新菌种，以解决因肠道菌群失调引起的便秘问题。

发明内容

本发明的目的是提供一株具有润肠通便功效的发酵乳杆菌TY-G04。根据序列比对和同源性分析结果显示TY-G04为发酵乳杆菌。通过验证实验确定TY-G04具有良好的消化道抗性和肠道定植能力，并且能通过促进5-HT和胃肠调节肽的分泌为大脑神经元传递信号，从而触发肠道蠕动反射，改善盐酸洛哌丁胺诱导的便秘。

发酵乳杆菌的分离纯化：收集四川省阿坝藏族羌族自治州红原县牧民家自然发酵牦牛酸乳，经过无菌生理盐水稀释，再涂布于MRS平板上进行培养；培养结束后挑选菌落，采用平板划线法得到纯化的菌株。

分离菌株的菌落形态和细胞形态：菌株纯化后在固体培养基中形成单菌落，表面湿润，中等大小，凸起，边缘整齐，呈圆形，菌落为不透明状，颜色呈乳白色。革兰氏染色后，在显微镜下细胞均呈紫色，为革兰氏阳性菌(G+)，形态呈杆状，与乳酸杆菌特征相符，形态结构均一，表明菌株为纯种。

PCR扩增16S rDNA序列：对纯化的菌株采用25μL反应体系进行PCR扩增，序列扩增后，委托生工生物工程(上海)股份有限公司对检测合格的PCR扩增产物进行测序，获得序列后，使用BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)在GenBank进行搜索和相似性比对。

菌株16S rDNA序列分析：16S rDNA基因序列测定后，将序列输入NCBI中的BLAST程序进行序列比对和同源性分析，结果显示TY-G04为发酵乳杆菌。发酵乳杆菌TY-G04的16SrDNA基因扩增产物的序列如SEQ ID No.1所示。

TY-G04的人工胃液耐受能力：制备菌悬液，将其与人工胃液混合，并置于恒温振荡器中培养，采用倾注平板法分别测定0h、3h的活菌数，计算菌株耐受pH3.0人工胃液的存活率。实验结果显示，TY-G04在pH＝3.0的人工胃液中培养3h的存活率为128.74％，具有极强的胃液耐受性。