[发明专利]一种区别C57BL/6亚系小鼠的引物、试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种区别C57BL/6亚系小鼠的引物、试剂盒和方法，区别C57BL/6亚系小鼠的引物包括9个SNP位点的内部正向引物、内部反向引物、外部正向引物和外部反向引物。区别C57BL/6亚系小鼠的试剂盒包括9个SNP位点的PCR反应体系。区别C57BL/6亚系小鼠的方法，包括步骤选择SNP位点，设计引物序列，制备模板DNA，ARMS‑PCR扩增，凝胶电泳，结果分析。对样品进行检测可直接区分出C57BL/6N亚系、C57BL/6J亚系及C57BL/6By亚系，同时也可鉴定到C57BL/6N亚系中的C57BL/6NJ，区别C57BL/6亚系小鼠的方法更加精确。

技术领域

本发明属于在生物检测的领域，具体涉及一种区别C57BL/6亚系小鼠的引物、试剂盒和方法。

背景技术

目前，随着近些年国内外对生命科学的重视，实验动物供应及对实验动物质量的把控也成为了科学研究中关键的一环。C57BL/6小鼠在科学研究中被广泛使用，然而，最常见的两大亚系C57BL/6N与C57BL/6J在诸多方面都存在着差异，而这些差异则会导致实验数据的偏差。除此之外还存在一个C57BL/6By亚系，大约1961年该亚系从C57BL/6N中分离出来。因此在进行动物实验时，一定要根据需求选择合适的亚系。但C57BL/6小鼠在外观上几乎一致，这就导致在购买或同时饲养过程中无法快速分辨。

C57BL/6各个亚系之间存在许多特异性的单核苷酸多态性(SNP)，这对小鼠的遗传监测和亚系鉴定帮助很大。目前，已有许多能将其区分的SNP位点被报道，同时对于SNP的检测方法也层出不穷，如TaqMan探针法、SNaPshot法、高分辨率熔解曲线分析(HRM)法、PCR-RFLP法等。然而，这些方法耗时且价格昂贵。公开号CN102586457A的专利申请文件公开了45个SNP，通过多重PCR-LDR反应、琼脂糖电泳及ABI377测序等方法对近交系小鼠进行分型和鉴定，该方法不仅成本高同时也不能对C57BL/6小鼠的亚型进行区分。而公开号CN110423826A的专利申请文件公开了12个SNPs位点及1个基因突变位点用于C57BL/6亚系小鼠的遗传检测，这些SNPs位点只能区分出C57BL/6J，并不能将C57BL/6By亚系从C57BL/6N中分离鉴定出来，而且采用的KASP方法在合成荧光引物及仪器使用上都需要投入更大的成本。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种区别C57BL/6亚系小鼠的引物、试剂盒和方法，解决了不能准确区分C57BL/6亚系和投入成本高的问题。

为了实现上述目的，本发明提供的一种快速区别C57BL/6亚系小鼠的引物，包括三组SNP位点的引物序列：

第一组，SNP位点：rs244794780，引物序列为

rs244794780-FI：SEQ ID NO.1，

rs244794780-RI：SEQ ID NO.2，

rs244794780-FO：SEQ ID NO.3，

rs244794780-RO：SEQ ID NO.4；

SNP位点：rs228546410，引物序列为

rs228546410-FI：SEQ ID NO.5，

rs228546410-RI：SEQ ID NO.6，

rs228546410-FO：SEQ ID NO.7，

rs228546410-RO：SEQ ID NO.8；

SNP位点：rs226310424，引物序列为

rs226310424-FI：SEQ ID NO.9，