[发明专利]一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用

权利要求书

1.一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物，其特征在于：包括环状RNA hsa_circ_0007321及其扩增体系。

2.如权利要求1所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物，其特征在于：所述扩增体系包括正向扩增引物5’-AGGAGGATGTTTCAGAAGGCT-3’和反向扩增引物5’-AGCTCTGTTGTCATTCGCTTC-3’。

3.如权利要求1或2所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物，其特征在于：所述引物在制备寨卡病毒感染诊断试剂盒中的应用。

4.如权利要求1或2所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于包括以下步骤：

S1，提取待检测样本和未感染样本的总RNA；

S2,将S1中待检测样本和未感染样本的总RNA分别逆转录成cDNA；

S3，用所述引物对S2中cDNA的hsa_circ_0007321进行qPCR扩增，同时，选择一个内参基因，对S2中cDNA的内参基因也进行qPCR扩增，得到hsa_circ_0007321和内参基因的ct值，用相对定量方法分析待检测样本中hsa_circ_0007321表达相对于未感染样本hsa_circ_0007321表达量变化。

5.如权利要求4所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于，所述内参基因为GAPDH，所对应的引物为：

正向引物：5’-GCCTCCTGCACCACCAACTG-3’；

反向引物：5’-ACGCCTGCTTCACCACCTTC-3’。

6.如权利要求4所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于S3中所述qPCR扩增反应体系：反应组分总体积为20μL，包含10μL的2×SYBR mix(ROXPremixed),1μL的Forward primer,1μL的Reverse primer,5μL的cDNA和3μL的Nuclease-free Water。

7.如权利要求4所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于S3中所述qPCR反应条件为：

预变性，时间5min，温度95℃，反应循环数1；

变性，时间15s，温度95℃；

退火，时间15s，温度60℃；

延伸，时间30s，温度72℃；变性、退火和延伸的反应循环数为40。

8.如权利要求4所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于S3中qPCR扩增结束后还包括熔解曲线分析，判断扩增产物的特异性。

9.如权利要求8所述的一种环状RNA作为寨卡病毒感染生物标志物的应用，其特征在于所述熔解曲线分析的反应条件为：

温度95℃，时间15s；温度60℃，时间1min；温度95℃，时间30s；温度60℃，时间15s；三个反应循环数均为1。