[发明专利]一种融合基因、其所编码的蛋白及其在鱼类虹彩病毒口服疫苗的应用

说明书

本发明公开了一种融合基因、其所编码的蛋白及其在鱼类虹彩病毒口服疫苗的应用，所述融合基因中含有大口黑鲈虹彩病毒衣壳蛋白MCP抗原优化基因、连接序列和标签序列。基于其制备得到的重组乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000 pNZ8148‑MCP，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20211160。使用该重组乳酸乳球菌制备得到的口服疫苗在免疫之后，会使大口黑鲈的血清特异抗体水平显著提高，且口服疫苗免疫后，肾脏中的IgM含量也会显著提高，相对免疫保护率可以达到60.47％，且无需注射，口服即可，操作简单，普及型和适用性强。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种融合基因、其所编码的蛋白及其在鱼类虹彩病毒口服疫苗的应用.

背景技术

大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus，LMBV)为虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员，是一种胞质型双链大DNA病毒。LMBV在两栖类、禽类等天然宿主体内，甚至鱼饵中均可以存活，存在多种传播途径，目前没有有效的治疗药物，只能靠科学饲养和及时消毒来预防。这类蛙病毒病夏季高发，发病时水温为25～30℃，会害成鱼，鱼类感染致死率高。

大口黑鲈(Micropterus Salmoides)，又名加州鲈，是一种重要的淡水养殖鱼类品种，生长速度快且对环境适应强。大口黑鲈年产量高，据统计，年产量突破约60万吨，是中国当前年产量最大的特种淡水鱼类之一，经济效益显著。但随着养殖规模不断增加，大口黑鲈病害问题也日益严重，特别是病毒类疾病，导致大口黑鲈苗种和成鱼出现大规模爆发性死亡，造成巨大的经济损失。近年来，随着研究人员先后从大口黑鲈病鱼分离到大口黑鲈虹彩病毒，证明了LMBV是引起大口黑鲈死亡的主要病原之一。而该病毒病的防治方法只有通过疫苗等免疫制品来预防。疫苗具有无残留、不易引起耐药性、安全高效等优点，作为大口黑鲈虹彩病毒病防控的重要途径，是加州鲈病害防控的发展趋势。

因此，开发一种能够有效预防或治疗大口黑鲈虹彩病毒的产品对于大口黑鲈的养殖以及大口黑鲈虹彩病毒病的防控具有极为重要的意义。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种融合基因、其所编码的蛋白及其在鱼类虹彩病毒口服疫苗的应用。本发明以乳酸菌L.lactis NZ9000作为表达宿主，pNZ8148作为表达载体，通过对大口黑鲈虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP抗原基因进行密码子优化并连接usp45短肽序列，制备得到了使用效果优异的活载体疫苗L.lactis NZ9000 pNZ8148-usp45-mcp。该疫苗投喂大口黑鲈，口服免疫效果优异，为大口黑鲈虹彩病毒口服疫苗的研究提供了新的思路。

本发明的第一个方面，提供一种大口黑鲈虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP抗原优化基因。

大口黑鲈虹彩病毒主要衣壳蛋白(Major capsid protein，MCP)是决定大口黑鲈虹彩病毒毒力的主要蛋白，也是开发各种大口黑鲈虹彩病毒疫苗的关键抗原蛋白。

根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述优化基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

发明人对于大口黑鲈虹彩病毒衣壳蛋白MCP抗原基因做了优化，提高大口黑鲈虹彩病毒MCP抗原基因中对应氨基酸乳酸乳球菌中高频密码子，减少低频密码子。该优化在不改变大口黑鲈虹彩病毒MCP抗原基因序列的基础上，经过密码子优化设计，可以大幅度提高重组大口黑鲈虹彩病毒MCP抗原基因的表达量，优化的序列与原序列的序列对比如说明书附图图1所示。

本发明的第二个方面，提供一种融合基因，该融合基因中含有本发明第一个方面所述的大口黑鲈虹彩病毒衣壳蛋白MCP抗原优化基因。

根据本发明的第二个方面，在本发明的一些实施方式中，所述融合基因还包含连接序列和标签序列。