[发明专利]一种NK细胞的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种培养基，其特征在于，包括水、组分1和组分2；

所述组分1由氨基酸和细胞因子组成；

所述氨基酸由精氨酸、胱氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、羟脯氨酸和牛磺酸组成；

所述细胞因子由IL2、IL12、IL15、IL17、IL21、IL7、IL18、CD80、CD86和CD137组成；

所述组分2由无机盐、糖类和维生素中的至少两种组成。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述组分1中各组分浓度如下：

所述氨基酸由精氨酸250～350mg/L、胱氨酸56～60mg/L、组氨酸8～12mg/L、异亮氨酸25～35mg/L、亮氨酸25～35mg/L、赖氨酸45～55mg/L、甲硫氨酸8～12mg/L、苯丙氨酸18～24mg/L、脯氨酸45～55mg/L、苏氨酸8～12mg/L、色氨酸6～10mg/L、酪氨酸22～28mg/L、缬氨酸16～20mg/L、羟脯氨酸10-18mg/L和牛磺酸18～22mg/L组成；

所述细胞因子由IL2 40～60KIU/L、IL12 4～6KIU/L、IL15 15～25KIU/L、IL17 0.8～1.2KIU/L、IL21 85～95KIU/L、IL7 2～4KIU/L、IL18 1.5～2.5KIU/L、CD80 0.8～1.2KIU/L、CD86 0.8～1.2KIU/L和CD137 0.8～1.2KIU/L组成。

3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述组分1中各组分浓度如下：

所述氨基酸由精氨酸300mg/L、胱氨酸58mg/L、组氨酸10mg/L、异亮氨酸30mg/L、亮氨酸30mg/L、赖氨酸50mg/L、甲硫氨酸10mg/L、苯丙氨酸21mg/L、脯氨酸50mg/L、苏氨酸10mg/L、色氨酸8mg/L、酪氨酸25mg/L、缬氨酸18mg/L、羟脯氨酸18mg/L和牛磺酸20mg/L组成；

所述细胞因子由IL2 50KIU/L、IL12 5KIU/L、IL15 20KIU/L、IL17 1KIU/L、IL2190KIU/L、IL7 3KIU/L、IL18 2KIU/L、CD80 1KIU/L、CD86 1KIU/L和CD137 1KIU/L组成。

4.根据权利要求1所述的NK细胞培养基，其特征在于，所述组分2中，

所述糖类由羟乙基淀粉100～1000mg/L和葡萄糖200～2000mg/L组成；

所述维生素由维生素H 0.05～0.15mg/L、维生素B5 0.1～0.3mg/L、叶酸1.5～2.5mg/L、维生素E 1.5～2.5mg/L、维生素B6 1.5～2.5mg/L、维生素B2 0.4～0.6mg/L、维生素B10.4～0.6mg/L、维生素B12 0.001～0.03mg/L组成；

所述无机盐由氯化钾250～350mg/L、氯化钠3500～4500mg/L、Na₂HPO₄1500～2500mg/L和硫酸镁150～250mg/L组成。

5.权利要求1～4任一项所述的培养基在PBMC或NK细胞的分离和/或培养中的应用。

6.一种NK细胞的培养方法，其特征在于，将单个核细胞或NK细胞接种至权利要求1～4任一项所述的培养基中进行培养。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

将PBMC或NK细胞接种至权利要求1～4任一项所述的培养基中，培养3-7天待细胞颜色微黄时，离心；

取细胞沉淀加入所述培养基37℃温浴30min，然后转移至细胞培养袋中，加入所述培养基培养5～9天。

8.根据权利要求6或7所述的培养方法，其特征在于，所述离心为400g离心3-15min。