[发明专利]一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法在审
| 申请号： | 202111573744.9 | 申请日： | 2021-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN114231515A | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 李洋;常丽荣;姚艳艳;陈晓丽;卢龙飞;王振华 | 申请（专利权）人： | 威海长青海洋科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N1/20;C12R1/15 |
| 代理公司： | 威海恒誉润达专利代理事务所(普通合伙) 37260 | 代理人： | 郭莹 |
| 地址： | 264316 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乳酸菌 海洋 细菌 发酵 褐藻 裂解 方法 | ||
1.一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)海洋细菌预培养：将海洋细菌接种于培养液中进行预培养；
(2)海洋细菌发酵培养液制备：将步骤(1)中培养的海洋细菌接种于发酵培养液中进行培养，以制备海洋细菌发酵培养液；
(3)嗜盐乳酸菌预培养：将嗜盐乳酸菌接种于MRS液体培养基中进行预培养；
(4)嗜盐乳酸菌-海洋细菌共生发酵培养：将步骤(3)中培养的嗜盐乳酸菌接种于步骤(2)中制备的海洋细菌发酵培养液中，进行嗜盐乳酸菌-海洋细菌共生发酵培养，制备共生发酵培养液；
(5)离心收集：将步骤(4)中制备的共生发酵培养液进行离心处理，收集上清液即为含有褐藻胶裂解酶的酶液。
2.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述海洋细菌为XS1412C菌株。
3.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述培养液的成分为：褐藻酸钠2％，磷酸二氢钾0.1％，氯化铵0.2％，蛋白胨5％，其处理条件为：加过滤的海水溶解。
4.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述海洋细菌的培养条件为：培养温度26℃，培养时间7h。
5.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(2)中所述发酵培养液的成分为：蛋白胨5％，葡萄糖5％，海藻酸钠2％，磷酸二氢钾0.1％，氯化铵0.4％，硫酸镁0.38％。
6.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(2)中所述海洋细菌的接种量为1～5％，所述海洋细菌发酵培养液的培养条件为：温度25～35℃，时间30～42h。
7.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(3)中所述MRS液体培养基的成分为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾0.4g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，碳酸钙20g，硫酸锰0.29g，吐温-80 1g，柠檬酸二铵2g，其处理条件为：pH 6.0，加水至1000mL，121℃下高压灭菌20min。
8.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(3)中所述嗜盐乳酸菌的培养条件为：接种量2％，培养温度28℃，培养时间36h。
9.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(4)中所述嗜盐乳酸菌的接种量为1～5％，所述嗜盐乳酸菌-海洋细菌共生发酵培养的条件为：培养温度25～35℃，培养时间30～42h。
10.根据权利要求1所述的一种嗜盐乳酸菌-海洋细菌共发酵产褐藻胶裂解酶的方法，其特征在于，步骤(5)中所述离心处理的条件为：温度4℃，转速8000r/min，离心20min。
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