[发明专利]干细胞无血清培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种干细胞无血清培养基及其制备方法和应用，涉及生物技术领域。本发明提供的干细胞无血清培养基包括基础培养基和特定浓度的二甲双胍、胰岛素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇、葡萄糖，经发明人研究发现，二甲双胍具有提高干细胞增殖的能力，将二甲双胍与胰岛素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和葡萄糖配合使用能够替代血清实现对干细胞的培养，该干细胞无血清培养基组成简单，安全性高，能够保持良好的细胞活性和增殖率，提高诱导干细胞的成骨成脂分化能力，有效规避使用血清所存在的问题，能够应用于干细胞的培养中。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种干细胞无血清培养基及其制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)是一种多能干细胞，具有干细胞的所有共性，即自我复制能力和多向分化能力，可从多种组织中获得，包括脐带血、骨髓、脂肪组织、牙周膜、牙髓和牙龈。乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliateddeciduous teeth,SHED)属于外胚间充质干细胞，是一种理想的干细胞来源，通过定向诱导分化，乳牙牙髓干细胞具有在体内和体外分化成骨细胞、肝细胞、肌细胞、神经细胞和皮肤细胞等的能力，在干细胞的治疗中有显著的优势和良好的应用前景。乳牙牙髓干细胞来源于自然替换的乳牙牙髓，对供体伤害小，无道德伦理问题限制，且移植后致瘤的风险低，同时因其相对缺少免疫源性，培养技术简单，并可冷冻保存，具有潜在的临床应用价值，已成为干细胞研究的热点。

目前所采用的间充质干细胞培养基基本都含有胎牛血清(Foetal Bovine Serum，FBS)，胎牛血清能够提供细胞在生长过程中贴壁和增殖所必需的激素和生长因子。但是胎牛血清在使用过程中逐渐显现出其应用的局限性：胎牛血清是从胎牛的血液中获取的，在提取过程中极有可能有被病原体污染的风险，并且在后续在间充质干细胞的培养过程中有可能将这些传染源传播给细胞；细胞的吞噬作用还会使胎牛血清中的蛋白分子细胞内化，无法通过洗涤而清除，而临床治疗通常需要小剂量多次输注细胞，残存的异种蛋白直接进入人体会导致机体的免疫排斥反应，从而一定程度上干扰治疗效果；同时对产品技术人员及医务人员(在处理产品时)也存在风险；胎牛血清需要在-20℃下冷藏保存，且存在批次间差异较大等问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种干细胞无血清培养基，该培养基组成简单，能够有效提高干细胞的增殖能力，以解决上述问题中的至少一种。

本发明的第二目的在于提供一种干细胞无血清培养基的制备方法，该制备方法简单方便。

本发明的第三目的在于提供一种干细胞无血清培养基在干细胞培养中的应用。

第一方面，本发明提供了一种干细胞无血清培养基，包括基础培养基和添加组分；

所述添加组分包括二甲双胍、胰岛素、甘露醇、甘氨酸、聚乙二醇和葡萄糖；

所述二甲双胍的浓度为1-1000μM；

所述胰岛素的浓度为10-100μg/mL；

所述甘露醇的浓度为1-5w/v％；

所述甘氨酸的浓度为0.5-1.5w/v％；

所述聚乙二醇的浓度为1-5w/v％；

所述葡萄糖的浓度为1-10w/v％。

作为进一步技术方案，所述二甲双胍的浓度为1-200μM；

所述胰岛素的浓度为10-50μg/mL；

所述甘露醇的浓度为1-3w/v％；

所述甘氨酸的浓度为0.5-1.5w/v％；