[发明专利]一种SASR-Cov-2病毒S重组蛋白、细胞株及构建方法与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种SASR‑Cov‑2病毒S重组蛋白、细胞株及构建方法与应用。本发明利用SASR‑Cov‑2病毒S重组蛋白(SARS‑COV‑2 S(His))可以构建出高效特异性表达SASR‑Cov‑2病毒S重组蛋白的急性肺损伤细胞株，其构建方法稳定性好，重现性高；其构建得到的细胞株为针对性筛选新型冠状病毒肺炎(COVID‑19)治疗药物提供细胞株模型。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种SASR-Cov-2病毒S重组蛋白、细胞株及构建方法与应用。

背景技术

急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)是临床常见急重症，以进行性加重的呼吸困难、顽固的低氧血症为临床特征，其严重阶段可发展为成人呼吸窘迫综合征(Acuterespiratory distress syndrome，ARDS)，ARDS是临床危重症发生急性呼吸衰竭的主要原因，病死率高达50％。常见的致病因素主要有：感染、有害物质吸入、外伤、休克、中毒等。

有研究证明SARS-Cov-2诱导的急性肺损伤(ALI)是新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者死亡的主要病因，其机制为SARS-Cov-2与细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，导致ACE2缺失及其反馈性诱导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素Ⅰ型受体(AT1R)介导的急性炎症反应。肺泡II型上皮细胞作为肺泡主要结构细胞，在炎症因子和氧化应激的攻击下，其凋亡或坏死的数量直接决定了ALI的严重程度及预后走向，ALI/ARDS缺乏特效治疗，因而其发病机制以及药物筛选是本领域内的研究热点。

由于急性肺损伤(ALI)的发病机制较为复杂，其病理基础是肺内失控的炎症反应所致的肺泡毛细血管膜损伤，进而导致肺水肿及透明膜形成。常规方法构建的急性肺损伤细胞模型，在面对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)筛选治疗药物其特异性、灵敏度较低，较难准确的筛选出治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)效果好、灵敏度高的药物成分或药物。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种SASR-Cov-2病毒S重组蛋白、急性肺损伤细胞株及构建方法与应用，本发明利用SASR-Cov-2病毒S重组蛋白可以构建出具有特异性的急性肺损伤的细胞株，为针对性筛选新型冠状病毒肺炎(COVID-19)治疗药物提供细胞株模型，特异性强，灵敏度高。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一目的，本发明提供了一种SASR-Cov-2病毒S重组蛋白，所述SASR-Cov-2病毒S重组蛋白的序列如SEQ ID NO:1所示，或与SEQ ID NO:1相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加的序列组成。

第二目的，本发明提供了一种检测SASR-Cov-2病毒S重组蛋白的引物，所述引物包括如SEQ ID NO:2～5所示的序列。

第三目的，本发明提供了一种基因，所述基因编码上述SASR-Cov-2病毒S重组蛋白。

第四目的，本发明提供了一种蛋白质表达载体，所述蛋白质表达载体携带上述基因。

第五目的，本发明提供了一种细胞株，所述细胞株携带上述的基因或蛋白质表达载体。

第六目的，本发明提供了一种急性损伤细胞株的构建方法，将上述的蛋白质表达载体进行转染及扩大培养，构建得到含有SASR-Cov-2病毒S重组蛋白的细胞株；通过逆转录、PCR和Western Blot对细胞株表达SASR-Cov-2病毒S重组蛋白的基因进行验证。

作为本发明所述急性损伤细胞株的构建方法的优选实施方式，所述细胞株包括Vero E6细胞株。