[发明专利]一种脱细胞基质生物材料的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞基质生物材料的制备方法，其包括以下步骤：

前处理：用纯化水洗掉动物组织表层的残渣，将动物组织置于10～40wt％氯化钠溶液中，振荡1-6h，再置于0.05～1wt％氯化钠溶液中，振荡12-20h，利用物理刮除方式去除肌肉层、表皮层，获得基质材料，其中所述动物组织选自牛心包、猪心包、羊胃粘膜、猪腹膜、猪膀胱膜、猪小肠粘膜中的至少一种；

脱脂：按照料液质量比1：5～20将所述基质材料与脱脂试剂混合，振荡30-180min；其中，所述脱脂试剂选自2～10wt％十二烷基磺酸钠溶液、0.1～1wt％氢氧化钠溶液、10～100wt％异丙醇溶液、20～80wt％正丙醇溶液、20～60wt％三氯甲烷和40～80wt％乙醇混合溶液、30～50wt％二氯甲烷和50～70wt％乙醇混合溶液或10～65wt％石油醚溶液的至少一种；

消毒：按照料液质量比1：3～10将所述基质材料与消毒剂混合，振荡30-180min；其中，所述消毒剂选自0.02～0.2wt％过氧乙酸与10～40wt％乙醇的混合溶液、0.02～0.2wt％过氧乙酸溶液、5～10wt％双氧水溶液、0.25～2.5wt％次氯酸钠溶液或者75～95wt％乙醇溶液；

脱细胞：按照料液质量比1：3～10将所述基质材料与0.01～0.5wt％碱性蛋白酶溶液混合，振荡60-240min；

去α-Gal抗原：选自反复冻融清洗、机械破碎清洗或用α-半乳糖苷酶溶液清洗中的至少一种方式进行；

灭菌：采用辐照灭菌或环氧乙烷灭菌的方式，对所述基质材料进行灭菌处理，获得所述脱细胞基质生物材料。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述去α-Gal抗原的步骤为：按照料液质量比1：5～10将所述基质材料与0.25～5U/mLα-半乳糖苷酶溶液混合，25-37℃，振荡12-48h。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述碱性蛋白酶的浓度为0.01～0.2wt％。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的脱脂、消毒、脱细胞及去α-Gal抗原步骤完成后，各自还包括采用清洗剂进行清洗。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述清洗剂选自0.1～1M PBS缓冲液、1～4mMHEPES缓冲液、0.1～1wt％氯化钠溶液、0.1～1wt％硫酸钠溶液或0.1～1wt％硝酸钾溶液中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述清洗步骤包括按照料液质量比1：3～10加入清洗剂，振荡10-20min，中途换液、重复清洗1-10次。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述辐照灭菌为钴60辐照灭菌，辐照剂量为10-40kGy。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述辐照剂量为20-30kGy。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法制备的脱细胞基质生物材料。

10.根据权利要求9所述的脱细胞基质生物材料，其包含胶原蛋白、层粘连蛋白、糖胺聚糖和角蛋白中的一种或多种；其中，基于上述脱细胞基质生物材料的胶原蛋白的质量含量为90-98wt％。

11.根据权利要求10所述的脱细胞基质生物材料，其中，所述胶原蛋白包含胶原蛋白I、胶原蛋白III和胶原蛋白V中的一种或多种。