[发明专利]一种基于RGO-Cu2O纳米材料的电化学传感器双信号检测GPC3的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的基于RGO-Cu₂O 纳米材料的电化学传感器双信号检测GPC3的方法，按以下步骤进行：

步骤一：RGO-Cu₂O NCs的制备

称取氧化石墨烯置于超纯水中，溶解，加入Cu(NO₃)₂和NaOH，然后加入水合肼，在充氮气的环境下反应，得到RGO-Cu₂O NCs溶液；

步骤二：电极的修饰与生物传感界面的构建：

（1）将SPE置于硫酸中，通过循环伏安扫描进行活化；

（2）将活化好的SPE浸入HAuCl₄溶液中，采用i-t技术进行恒电位沉积，用超纯水冲洗干净后，得到Au NPs /SPE；

（3）在Au/SPE上滴加RGO-Cu₂O NCs 溶液，恒温孵育后，再用PBS洗涤，得到RGO-Cu₂O NCs/Au NPs /SPE；

（4）在RGO-Cu₂O NCs /Au NPs /SPE上滴加GPC3apt溶液，孵育，用PBS洗涤，得到GPC3apt/RGO-Cu₂O NCs /Au NPs /SPE；

（5）将BSA溶液添加到GPC3apt/ RGO-Cu₂O NCs/Au NPs /SPE表面，孵育以阻断非特异性结合位点，洗涤吹干，得到电化学传感界面，备用；

步骤三：GPC3工作曲线的绘制

（1）在步骤二得到的电化学传感界面上滴加标准GPC3溶液，恒温孵育，得到GPC3/GPC3apt/ RGO-Cu₂O NCs/Au NPs /SPE电极；

（2）将所制备好的电极置入PBS缓冲液中，采用DPV进行扫描，记录传感器的响应电流值变化；

（3）在步骤三（2）所用的PBS缓冲液中加入H₂O₂溶液后，采用i-t法进行扫描，记录传感器的响应电流值变化；

（4）分别对不同浓度的GPC3进行检测，记录峰值电流，根据峰值电流和GPC3浓度的关系绘制两条工作曲线，计算出该方法的最低检测限；

步骤四：实际血清样本中GPC3的检测

（1）将不同种类的人血清样本与GPC3标准溶液以1:1的比例充分混合，制成实际待测样本溶液，在步骤二制备的传感界面滴加实际待测样本溶液，孵育，洗涤，得到工作电极，晾干备用；

（2）将工作电极放入PBS缓冲液中，采用DPV进行扫描，记录传感器的响应电流值；

（3）在步骤四（2）所用的PBS缓冲液中继续加入H₂O₂，采用i-t法进行扫描，记录传感器的响应电流值；

根据步骤三所得到的工作曲线，计算待测实际血清样本中GPC3的浓度。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤一中GO和Cu(NO₃)₂加入的量分别为25.0 mg和150.0 mg。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤二中所述的滴加GPC3apt溶液的浓度为1.0 μmol/L，滴加量为3.0 μL。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤三中PBS溶液中加入的H₂O₂浓度为5.0 μmol/L，滴加量为1.0 mL。