[发明专利]一种检测人前列腺癌抗原PSMA、AR-V7的免疫荧光试剂盒及应用

说明书

本发明涉及癌症生物学及液体活检技术领域，尤其涉及人前列腺癌抗原PSMA、雄激素受体剪接突变体AR‑V7免疫荧光检测试剂盒，适用于不同类型样本PSMA、AR‑V7检测，还涉及该试剂盒在检测PSMA、AR‑V7中的用途；该试剂盒可检测前列腺癌非体液性稀有有核细胞中PSMA、AR‑V7的表达水平来对前列腺癌患者的用药提供指导性的意见。通过针对PSMA、AR‑V7的特异性抗体来对患者非体液性稀有有核细胞进行分型，通过对PSMA、AR‑V7阳性细胞的数量和其AR‑V7的表达水平、细胞内定位来对前列腺癌的用药提供参考性的意见，本发明中免疫荧光标本的检测可适用于不同方法富集得到的非体液性稀有有核细胞样本，包括但不限于：阴性富集法、阳性富集、密度梯度分离法、膜过滤法、微流控法等。

技术领域

本发明涉及癌症生物学及液体活检技术领域，尤其涉及一种检测人前列腺癌抗原PSMA、AR-V7的免疫荧光试剂盒及应用。

背景技术

PSMA(Prostate-specific membrane antigen,PSMA)，即前列腺特异膜抗原，是由750个氨基酸组成的Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要表达于前列腺上皮细胞，具有较高的前列腺癌特异性。相关研究指出：有94.1％的前列腺癌患者组织切片中能够检测到PSMA，且其表达与肿瘤分级密切相关。进一步的研究显示：使用PSMA放射性配体能够快速准确的检测到早期的疾病发生及复发、转移。

AR-Vs(androgen receptor splice variants,AR-Vs)是指在雄激素受体mRNA的异常剪接或基因重组过程中产生的、在没有雄激素的情况下仍能促进靶基因转录的剪接突变体。在去势抵抗性前列腺癌患者中，AR-Vs的出现，使得患者对抗前列腺癌药物产生耐药性，增加治愈难度。AR-V7(androgen receptor splice variant 7,AR-V7)是目前已知的表达最为广泛的雄激素受体剪接突变体。临床试验表明：在AR-V7阳性的患者中，紫杉烷化疗比靶向雄激素受体的药物(enzalutamide或abiraterone)治疗更加有效；而在AR-V7阴性患者中，紫杉烷、enzalutamide以及abiraterone的治疗无显著性差异。同时，AR-V7在细胞中的不同定位也会影响患者治疗方案的选择。

目前临床对肿瘤治疗的监测主要依赖于病理学、影像学和血清学三种方法。病理学是肿瘤诊断的金标准，但是组织取样具有一定的创伤性，且受限于取材部位，同时由于肿瘤组织的异质性，单点组织取样不足以反应整体肿瘤状态，且难以重复取样动态监测。影像学方法应用较广泛，但是影像学一般存在辐射伤害。而且，影像学通常只反应肿瘤大小等信息，难以判断肿瘤的恶性程度。更重要的一点，影像学通常只能检测2mm以上的肿瘤组织，对于较小的肿瘤组织诊断敏感性较差，存在滞后性。血清学检测取样较为方便，但是灵敏度和特异性较差，且与病理生理相关性差。同样的，在治疗方面，目前临床上也存在一定的局限性。对于肿瘤患者，特别是发生转移的患者，目前通常只依据原发灶的信息来判断治疗方案，忽略了对转移灶甚至微转移灶的检测与治疗。治疗过程中通过影像学或血清学来判断治疗疗效，在疗效判断的精准性等方面存在一定的局限。

目前针对去势抵抗性前列腺癌，单纯的PSMA的检测对其治疗方案选择的指导意义并不明确，而组织中PSMA、AR-V7的检测又面临着检测是在不同组织切片上进行的，由于肿瘤细胞异质性的原因，单张片子上PSMA、AR-V7并不能反映患者整体的PSMA、AR-V7表达水平。因此需要一种新的方法能够对与疾病复发、转移相关的非体液性稀有有核细胞中PSMA、AR-V7表达水平进行检测，用于预测特定药物对患者治疗的作用，为疾病治疗方案的选择提供参考。