[发明专利]一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用，试剂盒由有试纸条、二氧化锰‑多菌灵抗体探针、浓缩检测液和离心管。所述试纸条包括(1)吸水垫，(2)硝酸纤维素膜，(3)PVC背板，(4)结合垫，(5)样品垫。按顺序依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫粘贴于PVC背板上。所述硝酸纤维素膜上分别包被有(6)羊抗鼠抗体构成的质控线和(7)多菌灵抗原构成的检测线。将二氧化锰‑多菌灵抗体探针与待测样品混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，待测物抗原与多菌灵竞争结合二氧化锰‑多菌灵抗体探针，二氧化锰纳米片截留在检测线上而产生颜色，通过肉眼观测实现对多菌灵的定性半定量分析。本发明具有特异性高、灵敏度好、操作简便的优点。

技术领域

本发明涉及果蔬产品中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用，属于分析化学技术领域。

背景技术

多菌灵(carbendazim，bcm)作为一种低毒、光谱的抗菌剂，常被用于由真菌引起的毒害的防治中。多菌灵主要通过叶面喷雾、种子处理或土壤处理等方式施用，因而多菌灵能渗入植物内部。多菌灵的残留能引起肝病和染色体畸变，对哺乳动物有毒害。长期食用农药残留超标的蔬菜，可能对人体健康产生不良影响。因此，建立健全多菌灵的快速检测手段对保证食品安全具有非常重要的现实意义。

虽然检测多菌灵的方法很多，但皆因其设备昂贵、操作繁琐、费时而受到限制。近年来，免疫层析法因操作简单，不需辅助仪器和试剂，3～5分钟出结果，并可肉眼判断等特点。二氧化锰纳米片具有水溶性好、制备简单、吸附能力强的优势，可与抗体偶联制备免疫传感探针。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了用于定性半定量检测果蔬产品中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其检测方法，为了实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒，包括盒体，盒体内有试纸条、二氧化锰-多菌灵抗体探针、提取液和离心管。所述试纸条包括吸水垫，硝酸纤维素膜，PVC背板，结合垫，其特征在于，在PVC背板上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述的硝酸纤维素膜上分别包被有羊抗鼠抗体构成的质控线和多菌灵抗原构成的检测线，两条线间隔距离为4-6mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为0.8-1.3mm，试纸条宽3.0-4.0mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为1mm。将二氧化锰-多菌灵抗体探针与待测样品混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，待测物抗原与多菌灵竞争结合二氧化锰-多菌灵抗体探针，二氧化锰纳米片截留在检测线上而产生颜色，通过肉眼观测实现对多菌灵的定性半定量分析。

优选的，二氧化锰-多菌灵抗体探针由二氧化锰纳米片和多菌灵单克隆抗体构成。具体制备步骤如下：

(1)取500μL 50μg/mL二氧化锰纳米片溶液,向其中添加2μL 0.2M K₂CO₃溶液及20μL 0.65mg/mL待测物抗体加入到上述溶液中混合均匀，室温下静置1h。

(2)向其中加入10μL 20％BSA及8μL 10％PEG₂₀₀₀₀，混匀后室温下静置30min。

(3)将安道管配平，4℃条件下，8000rpm离心40min，弃去上清，溶液复溶至200μL0.5％BSA，0.5％PVP，1％Tween 20及0.5％PEG₂₀₀混合液中待用。

优选的，将用PBS溶液稀释后的羊抗兔或羊抗鼠抗体包被于硝酸纤维素膜上作为质控线，包被量分别为0.7μL/cm，将用PBS溶液稀释后的多菌灵抗原包被于硝酸纤维素膜上作为检测线，包被量分别为0.7μL/cm，37℃烘干，斩切为宽为3.7mm的试纸条，封装备用。