[发明专利]METTL3在AML化疗耐药性中的应用

说明书

本发明具体涉及METTL3在AML化疗耐药性中的应用，属于分子生物学和医学技术领域。AML临床治疗效果不佳，预后情况较差，并且复发和难治病例无法通过常规疗法缓解。本发明通过分析AML化疗相对敏感患者与AML化疗耐药患者骨髓中METTL3表达差异，提供了一种用于检测急性髓系白血病化学药物治疗敏感度的分子标记；通过AML化疗敏感细胞株及化疗耐药细胞株及动物模型，证实了METTL3抑制剂的AML化疗耐药治疗效果。本发明研究还证实了，METTL3可通过调控AML细胞归巢介导AML化疗耐药。

技术领域

本发明属于分子生物学和医学技术领域，涉及METTL3在急性髓系白血病(AML)化疗耐药性中的应用，具体涉及一种用于鉴定AML化疗敏感度的分子标记、试剂盒及其检测方法以及METTL3抑制剂在制备抗AML化疗耐药药物中的应用。

背景技术

该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是目前最为常见的一类急性白血病，化疗依然是其临床治疗的主要手段。目前，仅20-30％的AML患者化疗药物治疗后可达长期无病生存(Disease-free survival，DFS)，而AML难治复发的主要原因是化疗耐药。因此，探究AML化疗耐药的发生机制是当前AML临床及基础研究中亟需解决的热点问题。

针对AML化疗耐药的发生机制，围绕不同的信号通路和关键调控分子，主要形成了以下学说：肿瘤ABC转运蛋白学说、凋亡失调控学说、关键基因突变学说和骨髓微环境学说等。骨髓微环境，又称骨髓龛，此学说认为一方面AML细胞上的细胞因子、生长因子和趋化因子等受体可与骨髓龛内的成骨细胞、窦状内皮细胞和基质细胞等分泌的多种可溶性因子结合，激活不同信号传导通路，促进细胞存活、增殖和抑制细胞凋亡，介导AML化疗耐药；另一方面，AML细胞可通过一系列粘附分子及细胞外基质成分与骨内膜或基质的成骨细胞紧密结合，介导AML细胞通过“Adhesion”、“Engraftment”和“Expansion”等过程归巢并藏匿于骨髓微环境中，躲避化学药物攻击的同时促进AML细胞的自我更新及生存，产生化疗耐药。但目前AML化疗耐药仍有待于进一步研究。

发明内容

针对上述现有技术的现状，发明人前期利用CRISPR-Cas9文库筛选技术、反向蛋白微阵列技术及转录组高通量测序技术联合生物信息学分析手段筛选，经深入而广泛的研究验证，首次发现METTL3基因与急性髓系白血病化疗耐药密切相关，可作为急性髓系白血病患者临床分子生物学化学药物疗效评估的分子标记；并且发明人利用后续体外细胞实验及动物体内实验首次证实，METTL3可作为AML化疗耐药治疗的靶点，同时，发明人通过二代测序手段及AML动物模型发现并证实METTL3可以调控AML细胞的归巢。因此，METTL3及其介导的AML细胞归巢可能是AML化疗耐药的关键机制之一。

基于上述发现，本发明提供以下技术方案。

本发明第一个方面，提供检测METTL3表达水平的试剂在制备评估急性髓系白血病患者化疗效果或预后的产品中的用途。

本发明第二个方面，提供了一种评估急性髓系白血病化疗效果及预后的产品，所述产品包括试剂盒，所述试剂包括可以检测METTL3表达水平的PCR反应试剂。

本发明第三个方面，提供一种非诊断目的是否存在METTL3基因及其定量检测方法，步骤如下：

①采用扩增METTL3的引物扩增待检样品，得到扩增产物；

②对扩增产物进行测序测定，检测扩增产物中是否存在METTL3；

③与内参基因GAPDH相比，利用2^-△Ct方法，计算METTL3的表达量。