[发明专利]一种等温HIV核酸检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括A管反应试剂和B管反应试剂；所述的A管反应试剂包括walker与Protect链、track单链、链霉亲和素磁珠、含NaCl的缓冲体系；所述的B管反应试剂包括金a、金b和Mg²⁺缓冲体系，所述的金a和金b是分别在纳米金的表面修饰a、b两种序列的DNA分子制成的。

2.根据权利要求1所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：

所述A管反应试剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将walker与Protect链杂交，形成部分互补的杂交双链；

(2)将链霉亲和素磁珠、步骤(1)制备的杂交双链、track单链共同分散在含NaCl的缓冲体系中得到反应体系；

(3)将步骤(2)得到的反应体系在旋转混匀仪中反应12-18小时得到修饰上DNA的磁珠；

(4)洗去上清，将修饰上DNA的磁珠重新分散在含NaCl的缓冲体系中，得到A管反应试剂；

所述的B管反应试剂的制备方法为：

取金a和金b分散至Mg²⁺缓冲体系中，得到B管反应试剂。

3.根据权利要求2所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：

步骤(1)中所述的walker与Protect链以摩尔比1：2在37℃下杂交；

步骤(2)中所述杂交双链：track单链＝1:8，所述的反应体系中杂交双链的浓度为0.5μM。

4.根据权利要求2所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：步骤(3)中所述反应的条件为：以20rpm转速室温旋转反应。

5.根据权利要求2所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：制备B管反应试剂时，将金a和金b分散至Mg²⁺缓冲体系中，最终每种金的浓度为16-20nM。

6.根据权利要求1、2或3所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：

所述walker与Protect链、track单链的核苷酸序列分别为：

所述a、b两种序列的DNA分子分别为：

	Sequence(5’-3’)
a序列的DNA分子	TATGAAGTGATGGAT-SH
b序列的DNA分子	TAGTGCATTTAACAT-SH

。

7.根据权利要求1或2所述的等温HIV核酸检测试剂盒，其特征在于：所述的链霉亲和素磁珠为直径1μM的链霉亲和素磁珠；所述含NaCl的缓冲体系为1×TAE 0.1M NaCl；所述的Mg²⁺缓冲体系为1×TAE 12.5mM Mg(A_C)₂缓冲体系。