[发明专利]一种异噁唑啉类兽药中间体铵盐有关杂质的分析方法

说明书

本发明公开了一种异噁唑啉类兽药中间体铵盐有关杂质的分析方法，所述中间体为2‑氨基‑N‑(2,2,2‑三氟乙基)乙酰胺，所述有关杂质为三氟乙胺盐酸盐以及甘氨酸，包括使用稀释剂溶解所述中间体铵盐和对照品，得试样溶液和对照品溶液；使用反相高效液相色谱仪检测甘氨酸和使用气相色谱检测三氟乙胺盐酸盐。本发明的方法能够有效分离2‑氨基‑N‑(2,2,2‑三氟乙基)乙酰胺的杂质，该方法高效、简便、灵敏度高、分离效果好。

技术领域

本发明属于药物中间体分析领域，具体涉及一种异噁唑啉类兽药中间体铵盐有关杂质的分析方法。

背景技术

氟雷拉纳(Fluralaner)和阿福拉纳(Afoxolaner)属于高端长效抗寄生虫药物，其通过干扰寄生虫的γ-氨基丁酸(GABA)门控氯离子通道发挥作用导致神经系统过度兴奋而死亡。Fluralaner是第一个提供长达12周的针对跳蚤和蜱虫的口服咀嚼杀体外寄生虫药。一粒咀嚼片或一剂局部用溶液可提供广谱和持久的保护，在2小时内开始杀死跳蚤，并控制4种蜱虫(黑腿蜱，美洲犬蜱，棕色犬蜱和孤星蜱)。Afoxolaner作为国内首个同时兼杀蜱虫和跳蚤的口服驱虫药，口服后可快速起效，通过阿福拉纳分子作用于节肢动物的神经传递突触，迅速使跳蚤和蜱虫在极度兴奋之下导致死亡，服用一片效果可持30天。

氟雷拉纳与阿福拉纳化学结构类似，它们拥有相同的一个关键片段2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺，氟雷拉纳与阿福拉纳其化学结构如下：

2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺作为构成氟雷拉纳和阿福拉纳重要片段，目前其报道的合成路线主要的合成路线如下几种：

由路线以及结构可知，主要由两部分构成(如下)，由此可知对于甘氨酸和三氟乙胺盐这两个主要杂质的研究对于2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺起着至关重要的作用。

为了更好地控制2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺以及阿福拉纳和氟雷拉纳的质量，本发明对自制以及市面上大部分的2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺中的有关物质进行了系统的研究，发现主要的杂质均为甘氨酸和三氟乙胺盐，目前关于2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺的质量研究的报道并不多。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种方便对2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺进行质量研究的通用办法。

本发明所采取的技术方案是：

一种异噁唑啉类兽药中间体铵盐有关杂质的分析方法，所述中间体为2-氨基-N-(2,2,2-三氟乙基)乙酰胺，所述有关杂质为三氟乙胺盐酸盐以及甘氨酸，包括：

使用稀释剂溶解所述中间体铵盐和对照品，得试样溶液和对照品溶液；

使用反相高效液相色谱仪检测甘氨酸和使用气相色谱检测三氟乙胺盐酸盐：

使用反相高效液相色谱仪检测甘氨酸包括：

使用反相高效液相色谱仪检测试样溶液中中间体铵盐及其杂质，确定色谱图，所述反相高效液相色谱的条件为：流动相:A：乙腈；B：七氟丁酸溶液；洗脱方式：梯度洗脱，以体积分数计，所述梯度洗脱具体为0min～5.0min，10％～20％A，90～80％B；5min～15min，20％～40％A，80～60％B 15min～20min，40％～65％A，60％～35％B；20min～22min，65％～80％A，35～20％B，20min～27min，80％～10％A，20％～90％B；40％～65％A，27min～35min，10％A，90％B；所述反相高效液相色谱检测器为电雾式检测器；

根据液相色谱结果，确定所述中间体和甘氨酸的量；