[发明专利]分枝杆菌的富集和选择性培养

说明书

本发明涉及一种富集和选择性培养生物学样品中包含的分枝杆菌的方法，其中将全部或部分所述样品接种于包含适于分枝杆菌发展和生长的营养成分的培养基之中/之上，特征在于所述培养基包含作为选择剂的至少9‑氯‑9‑(4’‑二乙氨基)苯基‑9,10‑二氢‑10‑苯基吖啶氢氯化物(或C‑390)及能抑制铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的物质。本发明还涉及适于实施这个方法以富集和选择性培养分枝杆菌的培养基。

本申请是2016年02月04日提交的题为“分枝杆菌的富集和选择性培养”的中国专利申请201680008539.9的分案申请。

本发明涉及培养和分离分枝杆菌的方法。更特别地，本发明涉及可用于检测、鉴别、分离和/或分析性研究分枝杆菌、例如存在于生物学标本和样品中的那些分枝杆菌的微生物学方法和培养基。

分枝杆菌属于放线菌目(Actinomycetales)，是直线或者有时略为弯曲形状的细小杆菌。由于其具有脂质富集的细胞壁限制染料渗透，因此难以通过常规技术和染料对分枝杆菌染色。然而，一旦染色，所述分枝杆菌的染色可以抵挡酸和醇二者的脱色。为此，其被描述为“酸-醇抗性”细菌。

根据一种基本分类法，根据两种主要类别列出不同的分枝杆菌种。

第一个类别是归并了严格病原性分枝杆菌，其寄生感染动物和人类。这些分枝杆菌是造成结核(结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、田鼠分枝杆菌(Mycobacterium microti)和卡氏分枝杆菌(Mycobacterium canetti))或者麻风病(麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae))的原因。

第二个类别归并了腐生或共生分枝杆菌，其通常是非致病性的。由此使用的术语是“非典型”分枝杆菌或者“非结核性”分枝杆菌(NTM)。后者普遍存在于我们的环境中，发现其散播于土壤、植物、灰尘、水和分配网络、食物等中无处不在。一些非结核性分枝杆菌通常对人类无害，而在免疫抑制对象中可以导致机会性感染，主要影响肺、皮肤和淋巴系统。

因此，从临床观点及也从卫生观点出发，无论其是否是病原性或者非结核性的，分枝杆菌的检测和/或鉴别是相当重要的。早期及特异性检测这些细菌使得可以提出关于治疗性处理、卫生消毒等的合适方案。就此而言存在各种技术，例如基因扩增(通过PCR)特定的核酸序列、抗原的免疫检测、质谱分析、微生物检测酶活性等。

无论其是什么，这些检测/鉴别方法通常需要培养待分析样品/标本中可能存在的分枝杆菌，以获得适于检测其的量。无论其是什么，这些检测/鉴别方法具有相同的障碍：分枝杆菌生长(croissance)和发展(développement)缓慢。

事实上，与其它细菌、酵母和真菌相比，病原性和腐生性分枝杆菌特征均在于相对缓慢的生长和发展。此外，在存在待研究的分枝杆菌的生物学样品中，所述分枝杆菌很少被分离；其通常污染有生长和发展快得多的伴随菌群。由于细胞分裂周期进展，样品中分枝杆菌的比例降低，由此增加了能观测和鉴别其的难度。

为了克服这种生长和发展缓慢和/或其污染其它微生物的问题，已经开发了对于分枝杆菌或者对于分枝杆菌特定种具有或多或少选择性的许多富集培养基和肉汤。

在最常用的这些中，-Jensen培养基是凝聚的(非琼脂)培养基，包含基于全蛋、马铃薯淀粉、天冬酰胺、甘油和矿物质的营养成分。这种培养基还含有孔雀石绿，以抑制伴随菌群(特别是革兰氏阴性细菌)。也提议加入青霉素和/或萘啶酸以增加其对于分枝杆菌的选择性。

相似组成的Coletsos琼脂培养基另外含有丙酮酸和谷氨酸、向日葵蓝(bleu detournesol)和明胶。