[发明专利]一种番茄专用复合微生态菌肥及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，

1)栽培土壤样品的取样

采用五点采样法进行采样；

2)栽培土壤样品微生物总量及比例确定

提取栽培土壤样品中的微生物的总DNA；

利用荧光定量法测定微生物DNA浓度；

纯化处理后，对微生物DNA的16s rRNA基因的V3-V4高变区进行扩增处理；扩增程序为：95℃预变性5min，95℃变性20s，55℃退火20s，72℃延伸20s，运行40个循环；扩增循环结束后，降温至60℃；

以大肠杆菌作为标准品，以16S rRNA作为目标序列，以515F/806R为PCR引物，通过高通量基因测序技术对扩增的产物进行测序，确定土壤样本中不同活性微生物的相对含量、比例；

3)建立标的土壤样品微生物数据库

通过高通量测序获得标的土壤样品中相关微生物组成分布比例信息；所述相关微生物菌群为芽孢杆菌、放线菌、光合菌、硝化菌、根瘤菌、解钾菌、解磷和固氮菌种的任一几种组合；

4)确定菌剂配方

将测定的栽培土壤样品微生物菌群含量与标的土壤样品微生物数据库信中相关微生物菌群的含量分布进行比较，若相对含量＞27％，则提供的配方中该微生物菌群的活性含量不低于1×10⁹cfu/g(mL)；若相对含量≤27％，则提供的菌剂配方中该微生物菌群的活性含量不低于4.5×10⁹cfu/g(mL)若相对含量＞25％，则提供的配方中该微生物菌群的活性含量不低于1×109cfu/g(mL)；若相对含量≤25％，则提供的菌剂配方中该微生物菌群的活性含量不低于5×109cfu/g(mL)；

5)发酵

按照菌剂配方提供微生物活性菌群，并利用菌液发酵基质进行发酵；其中，

所述发酵基质包括基质、纯水、酵母，所述基质添加量为基质与纯水重量之和的40％，所述酵母添加量为基质与纯水重量之和的6～10％；

所述基质组成，按照蔬菜与水果3:5的重量比例混合。

2.根据权利要求1所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，

所述1)中，对目标区域进行测量，采用五点采样法进行采样，距离根部不超过10厘米的位置处，取样深度20～30厘米的土壤作为样品。

3.根据权利要求1所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，采用的515F/806RPCR引物为515F-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA，806R-GGACTACHVGGGTWTCTAAT。

4.根据权利要求1所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，所述3)中，将测序结果与16S rRNA的微生物基因序列数据库进行对比，确定土壤样本中不同活性微生物的相对含量、比例。

5.根据权利要求4所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，所述16SrRNA的微生物基因序列数据库，以公共数据库菌株的系统分类名称和DNA序列信息为依托，而选择构建土壤样本中的微生物菌株类型，构建16S rRNA的微生物基因序列数据库；

所述公共数据库包括RDP、SILVA、GreenGene、UNITE。

6.根据权利要求1所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中，所述发酵基质还包括蔗糖，所述蔗糖的添加质量为基质与纯水重量之和的5-10％wt。

7.根据权利要求1～6任一所述的番茄专用复合微生态菌肥的制备方法，其特征在于，设定发酵罐温度29℃，前2-4天完全密封，4-8天少量通气，使活性复合微生物充分进行扩增，随后，密封发10-15天。

8.一种番茄专用复合微生态菌肥，其特征在于，所述菌肥由权利要求1-7任一所述方法制备而成。

9.一种番茄专用复合微生态菌肥的应用，其特征在于，用于克服番茄连作障碍。