[发明专利]一种批量快速制备玉米多堆柄锈菌菌液的方法

说明书

本发明提供了一种玉米多堆柄锈菌菌液的批量快速制备方法。本发明提供一种批量快速制备玉米多堆柄锈菌菌液的方法，包括：采集玉米多堆柄锈菌导致的发病叶片，将发病叶片置于阴凉通风干燥处风干2‑6天，挑选出无其他杂菌的叶片，将挑选出的叶片粉碎制成叶片粉末，将叶片粉末溶于含有少量吐温‑80的水溶液中，将水溶液通过双层医用纱布进行过滤，用清水洗涤滤渣3次并将滤渣内的液体挤净，滤出的溶液即为制备的玉米多堆柄锈菌菌液。本发明的方法制备的多堆柄锈菌菌液速度快、效率高，能够一次性制备大量的菌液，尤其适用于大田接种等需要短时间内制备大量菌液的情景。该方法为在田间研究玉米南方锈病提供了高效的菌液制备和接种的方法和技术支持。

技术领域

本发明属于植物病害研究领域，具体地，本申请提供了一种批量快速制备玉米多堆柄锈菌菌液的方法及其应用。

背景技术

玉米南方锈病是由多堆柄锈菌(Puccinia polysora Underw.)引起的一种气传病害，在多个地区均有发生。近年来，玉米南方锈病已成为影响玉米生产的主要病害之一，因此，人们对玉米多堆柄锈菌的研究和防治的重视逐渐增强。研究的对象也由实验室内少量植株逐渐转为大田内的大量植株，在大田尺度上开展玉米南方锈病研究，接种所需的孢子量远远大于实验室内开展相应研究所需孢子量。常规获取孢子的方法是人工目视挑取，费时费力且效率较低，对于需要进行大批量接种的大田试验，常规方法获取孢子并制备菌液的效率无法达到大田试验的要求，这也使得长期以来大田尺度上较大范围的玉米南方锈病试验一直受到菌液不足的限制。

中国专利201510765142.1公开了一种玉米多堆柄锈菌的单孢扩繁方法，其目的在于获得玉米多堆柄锈菌的纯菌系。中国专利201910852803.2公开了一种玉米多堆柄锈菌的接种扩繁方法，其目的在于对玉米多堆柄锈菌进行快速扩繁。上述两种方法均无法短时间内获取大量离体孢子并制成菌液。因此，亟需开发一种具有高效率、能够大批量快速制备玉米多堆柄锈菌菌液的方法。

发明内容

玉米多堆柄锈菌在玉米叶片上产生孢子堆，并将夏孢子保存其中，完全成熟后孢子堆会开裂并释放夏孢子。常规获取夏孢子的方法包括抖落法、水洗法等，上述方法只能收集到已开裂孢子堆中的夏孢子，极大的限制了所获取的孢子数量。未开裂孢子堆中的夏孢子也具有侵染能力，常规的挑取法(用接种针或接种铲刮取)效率很低，难以满足快速大量制备菌液的需要。

针对以上问题，发明人尝试改进了玉米多堆柄锈菌菌液的制备方法，发现将适合的发病叶片风干后打碎，将未开裂孢子堆中的夏孢子充分暴露，并以吐温-80的水溶液进行孢子提取，可以实现大量快速提取同时保持其活性。

一方面，本申请提供了一种批量快速制备玉米多堆柄锈菌菌液的方法，包括：将发病叶片风干并粉碎制成叶片粉末；将叶片粉末溶于含有吐温-80的水溶液中；过滤；用清水洗涤滤渣。

进一步地，所述将发病叶片风干包括将发病叶片置于阴凉通风干燥处风2-6天，优选3-5天。

进一步地，所述将发病叶片风干包括：将叶片展平，平铺于吸水纸上；置于阴凉通风干燥处风干5天；期间每隔12小时翻一次叶片。

进一步地，所述粉碎为利用农用粉碎机将风干后的发病叶片粉碎，得到玉米叶片粉末，优选玉米叶片粉末的直径小于0.5mm。

进一步地，所述吐温-80的水溶液浓度为0.01-0.03％，优选0.02％。

进一步地，所述玉米叶片粉末与吐温-80的水溶液质量比为1:20-1:50，优选1:30。

进一步地，所述过滤为双层医用纱布过滤。

进一步地，用清水洗涤滤渣为用清水洗涤滤渣3次，每次用水量小于已滤菌液的1/10。

进一步地，所述方法包括汰选叶片，去除含有其他植物病原菌的叶片的步骤，优选通过病害症状判断和/或通过光学显微镜观察孢子特征判断进行汰选。