[发明专利]BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用

说明书

本发明提供了一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用，所述重组蛋白包括BTNL2‑Fc，为小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域和免疫球蛋白IgG的重链Fc结构域编码的融合多肽，所述小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为小鼠的BTNL2第27位天冬氨酸到第452位丝氨酸；或者：重组BTNL2‑his，为人的BTNL2基因细胞膜外区域和组氨酸标签结构域编码的融合多肽，所述人的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸。本发明的重组蛋白可极大地减轻小鼠肠炎严重程度，减少死亡率，表明可作为治疗炎症性肠病的药物。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。

背景技术

炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)为累及全结肠的一种慢性自身免疫性疾病，主要包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn'sdisease，CD)。近年来，炎症性肠病在我国发病率逐年升高，已成为消化系统常见疾病和慢性腹泻的重要原因，且患者多为青壮年，因此日益受到重视。炎症性肠病目前缺乏特异有效地治疗方法，病情经常迁延不愈，而且慢性炎症性肠病极大地增加了患者罹患结直肠癌的风险1。因此对炎症性肠病分子、细胞机制的研究是自身免疫疾病研究中的热点。硫酸葡聚糖钠(DSS)被广泛用来在小鼠中建造炎症性肠病的模型，与人类的炎症性肠病具有较高的相似性，是研究人类炎症性肠病的理想模型2。

因此，有必要开发一种用于治疗炎症性肠病药物。

发明内容

本发明目的是提供一种BTNL2重组蛋白及其制备方法与在制备用于治疗炎症性肠病药物中的应用。

在本发明的第一方面，提供了一种BTNL2重组蛋白，所述BTNL2重组蛋白包括：

重组蛋白BTNL2-Fc，为小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域和免疫球蛋白IgG的重链Fc结构域编码的融合多肽，所述小鼠的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为小鼠的BTNL2第27位天冬氨酸到第452位丝氨酸；所述免疫球蛋白IgG包括IgG1、IgG2、IgG4中的一种；或者

重组蛋白BTNL2-his，为人的BTNL2基因细胞膜外区域和组氨酸标签结构域编码的融合多肽，所述人的BTNL2基因细胞膜外区域编码的氨基酸为人BTNL2第24位赖氨酸到第453位丝氨酸。

在本发明的第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子为编码所述BTNL2重组蛋白的基因，其中，所述重组蛋白BTNL2-Fc的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组蛋白BTNL2-his的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的第三方面，提供了一种含有所述的核酸分子的表达载体。

所述表达载体的制备方法，

其中，所述重组蛋白BTNL2-Fc的表达载体的制备方法，包括：

通过合成获得小鼠BTNL2-Fc全cDNA序列；

利用EcoRI和NheI酶切pFUSE--hIgG1-Fc2载体，回收获得3424bp的载体片段；

将所述BTNL2-Fc全cDNA序列克隆到所述载体片段中，获得表达载体pINFUSE-mBTNL2-hIgG2-Fc2。

所述重组蛋白BTNL2-his的表达载体的制备方法，包括：

通过合成获得人BTNL2-His全cDNA序列；

利用BamHI和XhoI酶切PET28a载体，将所述人BTNL2-His全cDNA序列克隆到所述载体片段中，获得表达载体PET28a-hBTNL2-His。