[发明专利]一种具有高热稳定性的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202111627381.2 | 申请日： | 2021-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN114250205B | 公开（公告）日： | 2022-11-11 |
| 发明（设计）人： | 宋建芳 | 申请（专利权）人： | 宋建芳 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 谢晓华 |
| 地址： | 100000 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 高热 稳定性 羟基 类固醇 脱氢酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种具有高热稳定性的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于：所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体是由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的7α-HSDH的第108位天冬氨酸替换为异亮氨酸得到的，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种具有高热稳定性的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因，其特征在于：所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因编码如权利要求1所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体。
3.根据权利要求2所述的具有高热稳定性的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因，其特征在于：所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体含有如权利要求2或3所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因。
5.一种重组表达细胞，其特征在于：所述重组表达细胞含有如权利要求4所述的重组表达载体。
6.一种催化剂，其特征在于：所述催化剂的有效成分包含如权利要求1所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体。
7.如权利要求1所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体或权利要求6所述的催化剂在催化鹅去氧胆酸制备7-酮石胆酸中的应用。
8.如权利要求1所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体或权利要求6所述的催化剂在催化牛磺鹅去氧胆酸制备牛磺-7-酮石胆酸中的应用。
9.一种制备具有高热稳定性的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、构建7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因工程菌株，所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因工程菌株含有如权利要求2或3所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因；
S2、将所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因工程菌株接种于发酵培养基中，进行扩大培养，得到所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤S1包括以下具体步骤：
S101、合成所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因；
S102、将所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因克隆至pET28a载体，得到重组载体；
S103、将所述重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，筛选高表达量的阳性转化子，得到所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体基因工程菌株。
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