[发明专利]猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

本发明涉及分子生物医学技术领域，具体涉及一种猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用，本发明试剂盒包括用于检测犬瘟热病毒、检测犬甲型流感病毒、犬副流感病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒、犬轮状病毒、犬巴贝斯虫、犬蛔虫、犬埃立克体、犬布鲁氏菌、狂犬病病毒、伯氏疏螺旋体、内参基因ACTB、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、猫冠状病毒、猫免疫缺陷病毒、猫白血病病毒、猫血支原体、猫支原体、猫衣原体、贾第鞭毛虫、弓形虫、巴尔通体和内参基因GAPDH的引物及探针，将采集猫犬DNA和RNA加入该试剂盒，采用实时荧光PCR仪进行PCR反应，每一循环采集FAM、HEX、ROX和CY5荧光信号，进行相关病原体的分析，较传统检测方法特异性更强、灵敏度更高。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，城市宠物数量猛增。宠物已逐渐成为许多家庭的一个重要部分，甚至以家庭成员相待,与人类接触甚为密切。但是，宠物给人们的生活带来乐趣的同时也给人们带来了难以察觉的隐患。威胁着人类的健康。宠物疫病的控制已成为国际社会共同关注的问题之一。猫和犬是目前国内最常见的宠物，据不完全统计猫犬在世界范围内人类饲养的家犬家猫约有8千万-4亿只，随着数量的剧增，人类对猫犬的健康问题也越来越关注。

目前宠物病原体检测主要有胶体金试纸、PCR检验，胶体金试纸是最常用的技术。胶体金试纸技术发展较早，操作最简单，因此目前市场占有率最高，约占病原体检验市场的7成左右，代表公司为行业巨头爱德士、林特医药等。但是由于这一技术精确度低，阳性符合率仅为6成左右，精确度已逐渐不能满足市场需求，且可检验病原体种类并不完善。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明所要解决的问题是：如何提供一种猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用，以解决现有胶体金试纸技术中对宠物病原体检测精确度低，阳性符合率低的问题。

为了解决上述问题，本发明采用了如下的技术方案：

多重荧光定量PCR，是由普通PCR延伸而来的一项PCR技术，在同一PCR反应体系里加入两对或两对以上引物，同时扩增出多个目的核酸片段的PCR反应，同时使用带有不同荧光基团修饰的特异性探针，来区分不同靶病原体的检测。因其可在单一PCR体系中，同时扩增多个目的片段，多重荧光定量PCR不仅保留了普通PCR特异性强、灵敏度高的优点，而且具有节约时间、节省人力物力等优点，在临床检测上具有很高的应用价值。

本发明提供一种猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括用于检测犬瘟热病毒的引物及探针、用于检测犬甲型流感病毒的引物及探针、用于检测犬副流感病毒的引物及探针、用于检测犬细小病毒的引物及探针、用于检测犬冠状病毒的引物及探针、用于检测犬轮状病毒的引物及探针、用于检测犬巴贝斯虫的引物及探针、用于检测犬蛔虫的引物及探针、用于检测犬埃立克体的引物及探针、用于检测犬布鲁氏菌的引物及探针、用于检测狂犬病病毒的引物及探针、用于检测伯氏疏螺旋体的引物及探针、用于检测猫疱疹病毒的引物及探针、用于检测猫杯状病毒的引物及探针、用于检测猫细小病毒的引物及探针、用于检测猫冠状病毒的引物及探针、用于检测猫免疫缺陷病毒的引物及探针、用于检测猫白血病病毒的引物及探针、用于检测猫血支原体的引物及探针、用于检测猫支原体的引物及探针、用于检测猫衣原体的引物及探针、用于检测贾第鞭毛虫的引物及探针、用于检测弓形虫的引物及探针、用于检测巴尔通体的引物及探针和中的任意一种或多种；

其中，所述用于检测犬瘟热病毒的引物及探针序列为：

CF1：5’-AGCTAGTTTCATCTTAACTATCAAATT-3’，

CR1：5’-TTAACTCTCCAGAAAACTCATGC-3’，

CP1：5’-FM-ACCCAAGAGCCGGATACATAGTTTCAATGC-BHQ1-3’；