[发明专利]人转铁融合蛋白及其制备方法

说明书

本申请公开了一种人转铁融合蛋白及其制备方法。本申请中，所述融合蛋白包括：人转铁蛋白多肽元件；和连接于所述人转铁蛋白多肽元件一端的信号肽多肽元件；其中，所述信号肽多肽元件的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。本发明提供的人转铁蛋白融合蛋白，其在CHO载体上具高表达量和高活性的特性，其抗原性甚至高于天然人转铁蛋白，适用于规模制备。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及人转铁融合蛋白及其制备方法。

背景技术

人转铁蛋白(transferrin，TRF)是一个能够结合铁的单体糖蛋白，主要生理功能为结合、运输三价铁离子,控制体液中游离铁离子浓度，提供可利用的铁和防止铁在血液中的沉积。成熟的转铁蛋白由679个氨基酸组成，分子量约80kD，可分为性质相似的两个结构域TFN和TFC。

血浆中TRF水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。在缺铁性的低血色素贫血中TRF的水平增高(由于其合成增加)，但其铁的饱和度很低(正常值在30％-38％)。相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍(如再生障碍性贫血)，则血浆中TRF正常或低下。TRF在急性时相反应中往往降低，因此在炎症、恶性病变时常随着白蛋白、前白蛋白同时下降。此外，在慢性肝疾病及营养不良时亦下降，也可作为营养状态的一项指标。但在监控检测人转铁蛋白以获取人体健康信息时必须

现有技术中，制备人转铁蛋白的方法主要为天然提取法和构建表达载体进进行体外扩增。天然提取法来源困难、提取步骤繁琐、质量和活性都不稳定，现有的构建表达载体进进行体外扩增制备人转铁蛋白虽然解决了转铁蛋白的来源问题，且简化了制备步骤，但仍然存在产率低、稳定性不好且蛋白活性低的问题，使得人转铁蛋白难以大规模制备。

因此，本领域尚需研发一种高效的、稳定的制备人转铁蛋白的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种融合蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种编码上述融合蛋白的多核苷酸。

本发明的另一目的在于提供一种含有上述多核苷酸的表达载体。

本发明的另一目的在于提供一种含有上述表达载体的宿主细胞。

本发明的另一目的在于提供一种制备上述融合蛋白的方法。

本发明的另一目的在于，提供一种含有上述融合蛋白的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括：

人转铁蛋白多肽元件；和

连接于所述人转铁蛋白多肽元件一端的信号肽多肽元件；

其中，所述信号肽多肽元件的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

在一些优选的方案中，所述信号肽元件连接于所述人转铁蛋白的N端。

所述连接应当理解为键连接或者序列连接，在一些优选的方案中，所述连接为键连接。

在一些优选的方案中，所述人转铁蛋白多肽元件选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽；

(ii)具有与如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列≥90％同源性的多肽；且所述多肽保持有SEQ ID NO:1所示多肽的活性；和

(iii)将如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列经过1至5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保持有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的活性的衍生多肽。