[发明专利]一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺

权利要求书

1.一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

1)种子液培养：制备种子培养基，将菌种接种到制备菌悬液后，接种到一级种子培养基中培养，然后取一级种子培养液接入到二级种子培养基中培养，获得二级种子培养液；

2)初始发酵：将种子培养液进行初始发酵培养；

3)单因素分析：通过单因素分析对裂殖壶藻的不同浓度碳源、氮源、接种量进行培养分析，以确定优化的浓度确定量；

4)正交实验：通过对优化的碳源、氮源、外源添加剂进行正交实验来确定最优的裂殖壶藻培养基成分；

5)摇瓶发酵：根据步骤3)和4)获得的最优发酵参数进行摇瓶发酵：

6)菌体收集：将步骤5)获得的菌液依次进行离心、干燥，即得裂殖壶藻菌粉。

2.根据权利要求1所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述步骤1)具体包括以下步骤：

1)种子液培养：制备种子培养基，将菌种接种到制备菌悬液后，接种到一级种子培养基中，在25C，200rpm培养48h，然后取一级种子培养液接入到二级种子培养基中，接种量5％，在25C，200rpm培养48h，获得二级种子培养液。

3.根据权利要求2所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述种子培养基包含以下成分：葡萄糖30g/L，酵母粉4g/L，蛋白胨4g/L，海盐20g/L。

4.根据权利要求1所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述步骤2)具体包括以下步骤：

2)初始发酵：将种子培养液接种到初始发酵培养基中培养，调节培养基PH6-7，在25C，200rpm培养96h。

5.根据权利要求4所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述始发酵培养基包含以下成分：葡萄糖80g/L，酵母粉4g/L，蛋白胨4g/L，海盐20g/L。

6.根据权利要求1所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述步骤3)单因素分析中的碳源为浓度分别为40g/L、60g/L、80g/L、100g/L、120g/L的葡萄糖；所述步骤3)单因素分析中的氮源包括浓度为4g/L、6g/L、8g/L、10g/L、12g/L的胰蛋白胨以及浓度4g/L、6g/L、8g/L、10g/L、12g/L的酵母提取物；所述步骤3)单因素分析中的接种量包括4％，6％，8％，10％，12％。

7.根据权利要求1所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述步骤3)单因素分析或所述步骤4)正交实验中包括以下通用分析步骤：

S1种子液培养：在装有100mL种子培养基的250mL挡板瓶中接入少量活化后的菌种，25℃、200r/min培养48小时后再次转接，将经过第二次转接的菌液作为种子液使用；摇瓶发酵培养：将种子液接入装有100mL发酵培养基的250mL摇瓶，25℃、200r/min培养4天；

S2生物量的测定：干重法：菌株发酵4天后，取100mL发酵液至已称重的50mL离心管中，8000r/min离心10min后，弃去上清液，去离子水震荡洗涤离心2次后弃去上清，然后将菌体置于-0.09～0.1Mpa、60℃～70℃的真空干燥箱中真空干燥，恒重后称量。

S3油脂含量测定：取一定量的干燥的裂殖壶藻粉通过索氏提取12h，计算油脂含量。

8.根据权利要求1所述的一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺，其特征在于，所述步骤4)正交实验中的外源添加剂包括海水晶、柠檬酸、硝酸铵、K₂HPO₄、MgSO4。