[发明专利]一种猪圆环病毒3型纯品蛋白的定量检测方法

说明书

本发明公开一种猪圆环病毒3型纯品蛋白的定量检测方法，该检测方法包括以下步骤：S10、将蛋白标准品配制成多个蛋白含量不同的标准液，测试每个标准液在280nm处的紫外吸收连续数值，并计算所述连续数值的曲线所形成的峰图面积，然后根据蛋白标准品的含量与所述峰图面积的关系绘制标准曲线；S20、获得待测PCV3 Cap纯品蛋白样品的峰图面积，然后根据所述标准曲线，确定所述待测PCV3 Cap纯品蛋白样品中的PCV3 Cap蛋白总含量。本发明提供的检测方法，是基于PCV3 Cap纯品蛋白样品在280nm处的紫外吸收连续数值曲线所形成的峰图面积与样品中的PCV3 Cap蛋白含量线性相关的原理进行检测，线性特性好、重复性好、准确度高，且无需任何化学显色过程，操作简单、检测成本低。

技术领域

本发明涉及蛋白质含量检测技术领域，特别涉及一种猪圆环病毒3型纯品蛋白的定量检测方法。

背景技术

猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type3，PCV3)是近几年发现的一种新型猪圆环病毒，能引起猪的皮炎肾病综合征、繁殖障碍以及心脏和多系统的炎症反应。流行病学研究显示，PCV3已在多个国家的养猪地区发现，该病毒的感染较为普遍，可与多种病毒存在共同感染的现象，患病率高达100％。因此，PCV3相关疫苗的研发至关重要。但由于PCV3在PK15、ST、Vero等细胞上均不产生细胞病变，目前仍未有研究资料报道能够成功通过体外细胞培养分离到PCV3，这也制约了PCV3灭活疫苗的研发。大量研究表明，PCV3Cap蛋白可在多种系统中表达并成功组装成病毒样颗粒(virus-like particle，VLP)，这也为制备PCV3亚单位或者嵌合表位疫苗奠定基础。

PCV3 Cap抗原含量是影响疫苗免疫效果的最主要因素。因此，疫苗抗原中蛋白质的定量检测分析是疫苗质量控制中最重要的工作之一。目前抗原定量检测方法主要有酶联免疫吸附实验法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)、BCA蛋白定量法和高效液相色谱法(HPLC)。其中，ELISA定量方法是将已知的抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，然后进行抗原的定量，但是由于反应的显色时间、洗板操作等均会影响实验结果，且涉及的实验步骤较多，因此，不同人员使用ELISA方法针对同一份样品的检测结果往往存在较大差异，对指导抗原配苗带来不利影响，此外，其捕获抗体对不同基因型的抗原亲和力的差异也限制了该方法的应用；BCA定量法由于显色反应与温度和时间的变化有关，因此每次测定都需做相应的标准曲线，且标准液放置一段时间后易染菌变质；HPLC是一种操作简单、高效和灵敏度高的分析方法，但操作起来繁杂，设备及使用成本较高。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种猪圆环病毒3型纯品蛋白的定量检测方法，旨在提供一种操作简单、重复性好、准确度高的PCV3型蛋白含量检测方法。

为实现上述目的，本发明提出一种猪圆环病毒3型纯品蛋白的定量检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

S10、将蛋白标准品配制成多个蛋白含量不同的标准液，测试每个所述标准液在280nm处的紫外吸收连续数值，并计算所述连续数值的曲线所形成的峰图面积，然后根据蛋白标准品的含量与所述峰图面积的关系绘制标准曲线；

S20、获得待测PCV3 Cap纯品蛋白样品的峰图面积，然后根据所述标准曲线，确定所述待测PCV3 Cap纯品蛋白样品中的PCV3 Cap蛋白总含量。

可选地，步骤S1中，所述蛋白标准品为PCV3 Cap蛋白。

可选地，在步骤S10之前还包括以下步骤：

S1、将PCV3 Cap纯品蛋白溶液的pH值调节至所述PCV3 Cap纯品蛋白溶液中的PCV3Cap蛋白的等电点，然后将所述PCV3 Cap纯品蛋白溶液离心，得到PCV3 Cap蛋白沉淀；

S2、将所述PCV3 Cap蛋白沉淀干燥，并称重；