[发明专利]鉴定大口黑鲈美国北方亚种和优鲈3号亲本的SRAP分子标记及其应用在审
| 申请号： | 202111635723.5 | 申请日： | 2021-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN114134237A | 公开（公告）日： | 2022-03-04 |
| 发明（设计）人： | 强俊;华吉祥;许爱国;孙建国;徐跑;张红英;陶易凡;路思琦 | 申请（专利权）人： | 南京宁渔种业研究院有限公司;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心;金澄福生物科技（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 薛红凡 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市高淳区现代农*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 大口 美国 北方 亲本 srap 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种用于鉴别大口黑鲈美国北方亚种和优鲈3号的SRAP分子标记，其特征在于，采用Me6/Em5引物对扩增得到；
所述Me6的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述Em5的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种用于鉴别大口黑鲈美国北方亚种和优鲈3号的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述SRAP分子标记中所述Me6/Em5引物对。
3.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR扩增用试剂。
4.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括大口黑鲈美国北方亚种扩增片段标准品和/或优鲈3号扩增片段标准品。
5.根据权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述大口黑鲈美国北方亚种扩增片段标准品包括长度为1000bp的DNA片段1、长度为800bp的DNA片段2和长度为750bp的DNA片段3。
6.根据权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述优鲈3号扩增片段标准品包括长度为1000bp的DNA片段4和长度为750bp的DNA片段5。
7.权利要求1所述SRAP分子标记或权利要求2～6任意一项所述检测试剂盒在鉴别大口黑鲈美国北方亚种和优鲈3号中的应用。
8.一种基于SRAP分子标记鉴别大口黑鲈美国北方亚种和优鲈3号的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待检测样本的基因组DNA；
2)以步骤1)中所述基因组DNA为模板，用权利要求1所述SRAP分子标记中Me6/Em5引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；
3)分析步骤2)中PCR扩增产物在750～1000bp范围内DNA片段的组成，当出现3个条带时判断为大口黑鲈美国北方亚种，当出现2个条带时判断为大口黑鲈优鲈3号。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的反应体系为30μL：
10.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的反应程序如下：
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