[发明专利]一种同时检测胰岛素与糖化血红蛋白的电化学检测方法

权利要求书

1.一种同时检测胰岛素与糖化血红蛋白的电化学检测方法，其特征在于：包括：

准备若干组三电极传感器件并通过循环伏安法分别在三电极传感器件上修饰金纳米材料；

孵育不同浓度的胰岛素抗体溶液，通过差分伏安法检测相同浓度的胰岛素溶液浓度，确定最佳浓度的胰岛素抗体溶液；具体过程如下：

利用不同浓度的胰岛素抗体溶液分别修饰三组不同的电极以制备三种胰岛素免疫电极，采用差分伏安法对相同浓度的胰岛素溶液进行电化学检测；扫描电压范围设置为-0.2～0.3v，电势增量为4mV，灵敏度为e^-4A/V；在电压的作用下，转移电子穿过电极表面与铁氰化钾发生氧化还原反应，电极表面物质越多，电子穿过电极界面难度增加，导致氧化电流越小，其氧化电流采用“电压-电流”曲线进行记录，不同浓度的胰岛素抗体溶液对应不同的氧化峰值电流；为明显区分胰岛素和糖化血红蛋白溶液的电流响应，在满足检测要求的前提下，确定最佳的胰岛素抗体溶液浓度；

再孵育相同浓度的胰岛素抗体溶液，通过差分伏安法检测不同浓度的胰岛素溶液，验证能够获得的浓度信息，确定胰岛素的浓度、检测灵敏度参数；具体过程如下：

通过电化学中的差分伏安法对不同浓度的胰岛素溶液进行检测；扫描电压范围设置为-0.2～0.3v，电势增量为4mV，灵敏度为e^-4A/V；差分伏安法使用连续的脉冲上升电位，其波形呈现上升阶梯状，各梯级振幅逐级升高，同时记录产生的电流值；在电压的作用下，转移电子穿过电极表面与铁氰化钾发生氧化还原反应，电极表面物质越多，电子穿过电极界面难度增加，导致氧化电流越小，其氧化电流采用“电压-电流”曲线进行记录，不同浓度的胰岛素溶液对应不同的氧化峰值电流；制作“胰岛素浓度-氧化峰值电流”标准曲线，确定电化学检测胰岛素的浓度、检测灵敏度参数；

孵育不同浓度的糖化血红蛋白抗体溶液，通过差分伏安法检测相同浓度的糖化血红蛋白溶液浓度，确定最佳浓度的糖化血红蛋白抗体溶液；再孵育相同浓度的糖化血红蛋白抗体溶液，通过差分伏安法检测不同浓度的糖化血红蛋白溶液，验证能够获得的浓度信息，确定糖化血红蛋白的浓度、检测灵敏度参数；

制备不同浓度配比的胰岛素和糖化血红蛋白的混合溶液，通过差分伏安法检测混合溶液获得胰岛素-糖化血红蛋白混合溶液差分伏安曲线；

提取胰岛素-糖化血红蛋白混合溶液差分伏安曲线的特征值；

利用机器学习回归分析模型对胰岛素-糖化血红蛋白混合溶液差分伏安曲线图解耦合，分别获得胰岛素和糖化血红蛋白溶液的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测胰岛素与糖化血红蛋白的电化学检测方法，其特征在于：所述三电极传感器件采用丝网印刷电极，包括工作电极、辅助电极和参比电极，其中工作电极和辅助电极均为碳电极，参比电极为银电极。

3.根据权利要求2所述的一种同时检测胰岛素与糖化血红蛋白的电化学检测方法，其特征在于：所述金纳米材料作为增加电极导电性的改性材料，修饰采用浓度为0.001mol/L的四氯金酸和0.01mol/L的硫酸钾溶液作为电沉积溶液，沉积时间为20分钟；以底液铁氰化钾作为电极表面反应的氧化还原剂，采用浓度为0.005mol/L的铁氰化钾溶液。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测胰岛素与糖化血红蛋白的电化学检测方法，其特征在于：所述免疫电极的制作过程如下：

取已修饰金纳米材料的丝网印刷电极，在工作电极表面滴涂胰岛素抗体溶液或糖化血红蛋白抗体溶液，4℃孵育16小时；孵育完成后，用磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，除去电极表面未结合的抗体；随后将牛血清白蛋白封闭液滴涂在三电极区域，37℃封闭2小时，然后使用磷酸盐缓冲液冲洗电极，并使电极在室温条件下自然干燥；随后将胰岛素溶液或糖化血红蛋白溶液滴涂在工作电极表面，37℃封闭1小时，即得到了免疫电极。