[发明专利]防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒病3型的三联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒病3型的三联灭活疫苗及其制备方法，所述三联灭活疫苗包括免疫上有效量的灭活抗原和免疫佐剂，所述灭活抗原包括鸭圆环病毒抗原、新型鸭呼肠孤病毒抗原和鸭腺病毒病3型抗原。本发明进一步公开了制备所述三联灭活疫苗的方法。本发明的防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒病的3型三联灭活疫苗安全性良好，不会产生抗原成份的相互干扰或影响。免疫保护效力试验证明，本发明三联灭活疫苗能够同时预防鸭呼肠孤病毒，鸭圆环病毒和鸭腺病毒病3型，可避免多次接种免疫出现的不良反应，具有制备方法简单、方便、多效、低成本、疫苗效价含量高等优点。

技术领域

本发明涉及一种防治鸭病毒病的三联灭活疫苗，尤其涉及同时防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒病3型的三联灭活疫苗，本发明进一步涉及该三联灭活疫苗的制备方法，属于防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒病3型的三联灭活疫苗及其制备领域。

背景技术

鸭圆环病毒主要侵害宿主的免疫系统，造成宿主免疫功能低下，进而易引发二重甚至多重感染，造成巨大的经济损失。鸭圆环病毒不能在各种细胞系及鸡胚中增殖，所以通过对鸭圆环病毒的分离纯化并以全病毒作为抗原制备疫苗困难较大。杆状病毒表达系统具备完整的翻译后修饰系统，明显优于细菌和酵母，且易于操作及大规模生产等。

新型鸭呼肠孤病毒病是一种以脾脏肿大、出血、坏死为主要特征的疾病，自2017年以来，在山东、河南、江苏等地区的养鸭场中发现。其易感日龄多在5d-25d范围内，发病率一般在10％-70％之间，死亡率一般在50％-60％之间。日龄越小，发病和死亡率越高。在天气寒冷的环境下，发病率和死亡率都有明显升高。

鸭腺病毒病3型最初于2014年在广东流行逐渐扩大到全国各地特别是南方数省。该病仅见于番鸭，多在15～20日龄发病，发病率40％～50％，死亡率35％～43％。剖检病变的特征为肝脏肿大、色泽变淡或黄化、肝脏出血、坏死，心包积液、心肌出血或坏死，肾脏肿大、出血、坏死。目前，该病已给现地养殖户带来了巨大的经济损失。

近年来，中国养鸭产业快速发展、规模不断壮大，但养殖水平和技术相对落后，各种鸭流行性疫病相继发生。从检测中国不同省份的鸭子的病料来看，其中鸭圆环病毒、新型呼肠孤病毒和鸭腺病毒3型是鸭的三种常发疫病，给中国养殖业造成了巨大的经济损失。

迄今为止，对于这三种疫病尚未有效的措施进行防控，由此尽快研制出一种安全有效的三联灭活疫苗尤为关键。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种安全且有效的同时防治新型鸭呼肠孤病毒病毒、鸭圆环病毒和鸭腺病毒3型的三联灭活疫苗；

本发明的目的之二是提供一种制备所述的三联灭活疫苗方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明首先提供了同时防治鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠孤病毒病和鸭腺病毒3型的三联灭活疫苗，包括免疫上有效量的灭活抗原和免疫佐剂，其中，所述的灭活抗原包括鸭圆环病毒抗原、新型鸭呼肠孤病毒抗原和鸭腺病毒3型抗原。

所述的鸭圆环病毒抗原可以是将鸭圆环病毒cap基因经过原核或真核系统重组表达后得到的重组蛋白；最为本发明一种优选的具体实施方式，优选为码子优化后的鸭圆环病毒cap基因采用真核表达的方式得到重组鸭圆环病毒cap蛋白；

作为参考，本发明提供了一种制备重组鸭圆环病毒cap蛋白的方法，包括：构建携带鸭圆环病毒cap基因的重组杆状病毒穿梭载体；将重组杆状病毒穿梭载体转染Sf9细胞得到重组杆状病毒；扩增重组杆状病毒。

所述的鸭呼肠孤病毒抗原优选是将新型鸭呼肠孤病毒S株(其微生物保藏编号为：CGMCC No.20000)在LMH细胞中进行增殖得到的病毒液。

所述鸭腺病毒3型抗原的制备可以是将鸭腺病毒3型生产用毒种接种易感鸭胚，收获胚液，得到鸭肝炎病毒抗原。