[发明专利]一种基于胶体金双抗夹心法的新型冠状病毒中和抗体定性检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种基于胶体金双抗夹心法的新型冠状病毒中和抗体定性检测试剂盒，其包括试纸条和样本稀释液，所述试纸条中包括片材、纳米胶体金标记的新型冠状病毒S‑RBD蛋白、样品垫、检测线和质控线，其特征在于，所述纳米胶体金标记的新型冠状病毒S‑RBD蛋白含有BSA和PEG，所述样本稀释液包括表面活性剂、Tris缓冲溶液和牛血清白蛋白，所述表面活性剂选自月桂醇聚环氧乙烷(9)醚、月桂醇聚氧乙烯醚、脂肪醇环氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯(10)醚中的一种或者多种的组合。采用本发明的技术方案，可以提高S‑RBD胶体金标记物的稳定性、提高试剂盒的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及疾病诊断领域，具体涉及一种基于胶体金双抗夹心法的新型冠状病毒中和抗体定性检测试剂盒及其应用。

背景技术

胶体金标记技术是上世纪80年代，继荧光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的标记方法。1971年Faulk和Taylor将胶体金引入到免疫生化中，此后，该标记方法在药物检测、生物医学检测、农兽药检测、临床疾病检测等领域得到广泛的应用。目前国内外商品化的胶体金免疫层析试剂盒有数百种之多，例如常见的有：早早孕试剂盒、毒品检测的试剂盒、大便隐血检测的试剂盒、传染性疾病检测的试剂盒等。

胶体金标记技术是将胶体金作为标记示踪物，最初应用于免疫电镜中；随着免疫学的发展，逐步应用于动物凝集实验、免疫印迹、光镜染色、免疫斑点及免疫层析技术。由于胶体金表面的高电子的密集性，胶体金可以和多数蛋白牢固的结合在一起，但又不破坏蛋白的活性。

将胶体金运用于免疫检测中，主要是用胶体金标记抗原或抗体；然后将与标记的抗原或抗体能发生免疫学反应的抗体或抗原固定在基质上，从而将抗原或抗体的结合以肉眼看见的颜色变化来显示出来。胶体金和蛋白的结合程度、反应体系的PH、反应的蛋白浓度等都会影响到蛋白与胶体金的结合。

2019年，爆发的新型冠状病毒已经造成全球大流行，而且这种流行就有较长的持续性和反复性。这一病毒被国际病毒分类委员会正式命名为SARS-CoV-2,WHO将这一病毒导致的疾病名称为COVID-19。SARS-CoV-2属冠状病毒家族，β属冠状病毒；呈椭圆形或圆形，直径为60--140nm。该病毒由单股正链RNA、蛋白衣壳、包膜(外有刺突)3部分结构组成。其sgRNA负责编码刺突蛋白(spike，S)，胞膜蛋白(envelope，E)、膜蛋白(membrane，M)和核衣壳蛋白(nucleocapsid，N)4种结构蛋白及辅助蛋白。目前研究表明，SARS-CoV-2主要是通过S蛋白的RBD结构域与宿主靶细胞上的相应受体ACE2(血管紧张素受体蛋白)结合，进入细胞，完成感染过程。而新型冠状病毒的中和抗体可与SARS-CoV-2S蛋白RBD结合，从而阻断S-RBD与ACE2受体的结合。新型冠状病毒的疫苗也是根据这一原理进行制备的。基于这一原理的检测方法，可用于对人体内中和抗体的检测。

目前，主要的检测方法是基于S-RBD和ACE2结合的竞争法的胶体金层析检测。其主要原理是标记S-RBD或ACE2，检测线包被ACE2或S-RBD，通过是否显色来判断，样本中是否含有中和抗体。

例如，中国专利申请CN112051400A公开了一种检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒及检测方法，所述的试剂盒包括检测卡和样本稀释液，所述的检测卡包括PVC底板、样品垫、滤血垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的样品垫、滤血垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次互相交错搭接后粘贴在所述的PVC底板上，形成试纸板，切割，得到所述的检测卡。本发明制备的检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒可以快速的检测出新型冠状病毒中和抗体，操作简单，结果直观，安全廉价，适合现场快速检测；其次，利用本发明制备的试剂盒检测新型冠状病毒中和抗体含量的方法，通过与胶体金免疫分析读数仪结合，可以准确测定待测物的含量，15min内出结果。

然而，如何提高S-RBD胶体金标记物的稳定性、提高试剂盒的灵敏度和特异性依然是本领域技术人员需要进一步解决的技术问题。

发明内容