[发明专利]一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的组合物及方法

权利要求书

1.一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的组合物，其特征在于，包括1份10倍的等温延伸测活缓冲液、终浓度为5mM的MgCl2、去RNA酶水、终浓度为0.4uM引物M13R、1.6份SYBR Green I、终浓度为0.2Nm的dNTPs、终浓度为10ng/ul M13ssDNA；

所述10倍的等温延伸测活缓冲液包括：去RNA酶水、终浓度为200mM的Tris8.0、终浓度为100mM的KCl、终浓度为10mM的DTT、终浓度为1mM的EDTA、0.5％的CA630、0.5％的Tween20、终浓度为1mg/ml的BSA；

所述M13ssDNA的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述引物M13R的序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

在同一反应过程中，将对照酶或待测酶与所述实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的组合物混合，获得以反应速率稳定后的某一时间的信号值与起始信号值的差值ΔRn；

以对照酶不同浓度梯度为横坐标，对照酶的ΔRn为纵坐标建立标准曲线，获得标准曲线y＝kx+b；

待测酶的酶活X＝[(待测酶的ΔRn-b)÷k]*N；

式中，待测酶的ΔRn为在同一反应过程中，待测酶与所述超高速Taq DNA聚合酶酶活的组合物混合，获得以反应速率稳定后的某一时间的信号值与起始信号值的差值ΔRn，k为以对照酶不同浓度梯度为横坐标，对照酶的ΔRn为纵坐标建立标准曲线，获得标准曲线的斜率，N为待测酶的稀释倍数。

3.根据权利要求2所述的一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的检测方法，其特征在于，所述反应速率稳定后的某一时间为31分钟或者11分钟。

4.根据权利要求2所述的一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的检测方法，其特征在于，所述反应条件为：72℃，30秒，62循环。

5.根据权利要求2所述的一种用于实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的检测方法，其特征在于，所述对照酶或待测酶与所述实时检测超高速Taq DNA聚合酶酶活的组合物混合体积比为1:4。