[发明专利]用于检测多巴胺D4靶点化合物生物学活性的细胞系和方法

说明书

本发明公开了一种用于检测多巴胺D4靶点化合物生物学活性的细胞系和方法，所述细胞系包括编码多巴胺D4受体蛋白的多核苷酸以及编码由CRE转录调控元件控制表达的荧光素酶的多核苷酸。本发明还公开了一种使用所述细胞系检测多巴胺D4靶点化合物生物学活性的方法。本发明的细胞系可快速、准确、高效地检测多巴胺D4靶点治疗药物的生物学活性。此外，本发明提供的检测方法无需复杂的仪器或操作步骤，便可完全满足针对多巴胺D4受体的小分子化合物的生物学活性检测。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说，本发明涉及一种包括编码多巴胺D4受体蛋白的多核苷酸和编码由CRE转录调控元件控制表达的荧光素酶的多核苷酸的用于检测多巴胺D4靶点化合物生物学活性的细胞系；本发明还涉及一种使用所述细胞系检测多巴胺D4靶点化合物生物学活性的检测方法。

背景技术

多巴胺能系统在神经调节中起着重要的作用，如运动控制、动机、奖赏、认知功能、母性和生殖行为。多巴胺(Dopamine)是一种神经递质，通过酪氨酸的连续羟基化和脱羧化在神经元末梢产生，并通过囊泡单胺转运体2装载到突触囊泡中胞吐释放。释放的多巴胺可以被多巴胺转运蛋白重新摄取，也可以被儿茶酚-O-甲基转移酶和突触前单胺氧化酶降解。多巴胺与位于靶细胞膜上的多巴胺受体结合，从而发挥作用。

多巴胺受体属于GPCRs超家族，主要包括D1、D2、D3、D4和D5五种类型。其中，D1和D2是大脑中表达最多的多巴胺受体，并且它们几乎不在同一细胞中同时表达。根据多巴胺受体的结构和药理特性，它可分为两大类：D1类受体，包括D1和D5；D2类受体，包括D2、D3和D4。所有的多巴胺受体都是代谢型受体，其中D1和D5受体与G_αs/olf蛋白偶联，刺激第二信使cAMP的产生；D2、D3和D4受体与G_αi/o蛋白偶联，抑制细胞内cAMP的生成。

D1受体主要表达于尾壳核(CPu)，伏隔核(Acb)，视束(OT)，脑皮层(Cx)和杏仁核。D5受体和D1受体相比表达局限，仅在海马，外侧乳头体核和下丘脑束旁核表达。D2受体主要在脑的CPu，OT和Acb中表达，在黑质和腹侧被盖部(VTA)也有表达，这些区域发出多巴胺纤维，提示D2受体有突触前定位。相反，D1类受体只有广泛的突触后定位。在脑外，D2受体还定位于视网膜，肾脏，血管系统和垂体。D3受体的分布仅限于Callija岛，隔核，下丘脑和丘脑，以及小脑中的某些区域。D3受体还分布于黑质致密部，提示它也存在突触前定位。在前额叶皮层，杏仁核，嗅球，海马，丘脑和中脑可见D4受体的mRNA高度表达。

目前，对于多巴胺受体激活的信号转导途径主要包括有：对腺苷酸环化酶的激活，或抑制钙信号的调控。D1类受体正性调控环磷酸腺苷(cAMP)的水平。进一步激活蛋白激酶A(PKA)，PKA磷酸化细胞质和细胞核因子，调控细胞代谢包括离子通道功能，使跨膜G蛋白偶联受体去敏感化，导致细胞神经递质释放。D2类受体普遍抑制腺苷酸环化酶(AC)活动。首先在垂体和纹状体细胞发现D2类受体抑制cAMP水平。D2受体通过偶联信号通路抑制AC，并可被百日咳毒素(PTX)阻断。D3受体在几个细胞株中抑制内源性cAMP水平，但抑制程度低于D2受体。有报道，D4受体抑制视网膜和一些细胞株的cAMP的聚集。

大量研究表明多巴胺受体D4(D4亚型)与注意力缺陷多动障碍(ADHD)、癌症转移，甚至勃起功能障碍相关。类似的多巴胺受体亚型在精神分裂症、上瘾、阿尔茨海默病、抑郁症和帕金森病等疾病中发挥着至关重要的作用。