[发明专利]一种利用ISSR引物鉴别黑鲷真鲷杂交子代的分子标记方法在审
| 申请号： | 202111655448.3 | 申请日： | 2021-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN114350815A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 陈淑吟;张志勇;吉红九;贾超峰;孟乾;祝斐;徐大凤;张志伟;高波;孙瑞健;赵永超;汤小建;肖李霞;周亚文 | 申请（专利权）人： | 江苏省海洋水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所(普通合伙) 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 226007 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 issr 引物 鉴别 真鲷 杂交 子代 分子 标记 方法 | ||
1.一种利用ISSR引物鉴别黑鲷真鲷杂交子代的分子标记方法，包括：
(1)分别提取黑鲷、回交及杂交子代3个种质个体的总DNA，4℃以下保存备用；
(2)采用UBC899引物对上述总DNA进行PCR扩增；其中，所述UBC899引物序列为：CATGGTGTTGGTCATTGTTCCA；
(3)凝胶电泳检测PCR产物的DNA条带情况，其中杂交子代无扩增带，黑鲷、回交子代在1000bp处有一条明显条带分布。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的PCR扩增反应体系为：引物0.5mmol/L，DNA模板约20ng，Buffer 2.5μl，dNTP 0.5μl，Mg2+ 1.5μl，Taq聚合酶0.25μl，添加ddH2O至25μl。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的PCR扩增反应条件为：94℃预变性5min，然后进入循环：94℃45s，52℃45s，72℃2min，共39个循环，最后一个循环结束后再在72℃继续延伸10min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的凝胶电泳检测条件为：制备浓度为1％琼脂糖凝胶后，吸取2-4μl的PCR产物，加入0.8μl的溴酚蓝混匀，点入胶孔，另外，吸取2μl marker标准分子量点于另一胶孔，一起跑胶；电压为120V，电泳时间为20min后，通过凝胶成像系统，检测PCR产物的DNA条带情况。
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