[发明专利]同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法

说明书

本发明提供了一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，包括先配制空白溶液，再配制含吡喹酮、氯芬新、米尔贝肟的供试品溶液，最后配制系统适用性试验溶液，分别注入液相色谱仪中，记录紫外波长下的色谱图；稀释剂为乙腈，液相色谱仪中使用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，紫外检测波长为230nm，进样量20μL；流动相A为磷酸溶液，含量为10‑30wt％，流动相B为乙腈，含量为70‑90wt％；本发明的检测方法简便，节约时间，降低成本，有很好的专属性、准确度、线性、耐用性及精密度，用于检测三组分的含量是适宜的、准确的，从而可用于宠物药日常检测的需要。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法。

背景技术

吡喹酮是一种具有驱虫活性的吡嗪诺喹啉衍生物，在20世纪70年代由拜耳公司研发，是一种广谱抗吸虫和绦虫药。

吡喹酮作用机制未被完全阐明，主流的说法认为吡喹酮可能改变虫体对Ca²⁺的渗透性，促使其内流导致虫体活动兴奋、肌肉挛缩，从而不能很好吸附于血管壁；另一方面，虫体皮层的损伤也会使得虫体表面的抗原决定簇暴露，从而被宿主免疫系统识别，吸引免疫细胞对其进行攻击。因此，吡喹酮的杀虫机制可概括为药物对虫体的直接作用以及宿主的免疫效应两部分。

氯芬新为苯甲酰脲类杀虫剂，是苯甲酰脲类杀虫剂中的第一大产品。氯芬新的主要市场在动物健康领域，用于防治猫、狗身上的跳蚤。

此类杀虫剂为昆虫生长调节剂，通过抑制几丁质合成来阻止昆虫外骨骼的进一步生长。该类产品无内吸性，具有胃毒作用。虽然外皮脱落伴随昆虫的整个生命周期，而苯甲酰脲类杀虫剂对幼虫蜕皮阶段最有效。这类产品速效性差，通常与其他传统杀虫剂复配，以提高产品的速效性，增加产品的持效作用。

米尔贝肟为半合成大环内酯类抗寄生虫药物，是米尔贝霉素A₃和米尔贝霉素A₄的肟的衍生物的复合物(比率A4:A3＝80:20)，由Sankyo和Ciba-Geigy(现在的诺华)共同研发，临床最初用于预防犬心丝虫病和其他体内寄生虫感染的控制。

米尔贝肟作用机制与其他大环内酯类抗寄生虫药物类似，米尔贝肟作为神经细胞中GABA(γ-氨基丁酸)神经递质的激动剂，还可与无脊椎动物的神经和肌肉细胞中的谷氨酸门控Cl^–通道结合。在这两种情况下，会阻断寄生虫的神经信号传递，使虫体瘫痪麻痹，导致虫体死亡。米尔贝肟还通过减少虫体产卵或诱导产生异常卵子来影响一些寄生虫的繁殖。但由于绦虫和吸虫虫体内缺少GABA传导介质和谷氨酸门控的Cl^–通道，所以米尔贝肟对绦虫和吸虫无效。

以上3个成分杀虫谱互补，联合应用于宠物驱虫有非常良好且广谱的效果。目前海外市场上已出现了以此3个成分配伍的口服宠物驱虫药，但其含量的检测方法并未公开。目前公开的资料中，这三个成分需要用三个不同的HPLC方法来检测。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法。

为达到上述目的，本发明的解决方案是：

一种同时检测吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟三组分含量的方法，其包括如下步骤：

(1)、量取稀释剂作为空白溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；

(2)、分别称取三组分吡喹酮、氯芬新和米尔贝肟，加稀释剂配制成每1mL含26μg吡喹酮、73μg氯芬新、4.8μg米尔贝肟溶液作为供试品溶液，注入液相色谱仪中，记录210nm、230nm和255nm波长下的色谱图；