[发明专利]一种防治烟草青枯病的生物制剂、制备方法和应用

权利要求书

1.一种防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

以枯草芽孢杆菌YWS-20-2072为菌种，将菌种进行活化；

将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌种进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液；

将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液；

将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液，枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液即为防治烟草青枯病的生物制剂。

2.根据权利要求1所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，以枯草芽孢杆菌YWS-20-2072为菌种，将菌种进行活化包括如下步骤：将﹣80℃保存的枯草芽孢杆菌YWS-20-2072接种在液体LB培养基上，36℃培养12h，得活化的枯草芽孢杆菌YWS-20-2072。

3.根据权利要求1所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌种进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液包括如下步骤：按10％接种量，将活化的枯草芽孢杆菌YWS-20-2072接种到一级种子培养基，在培养温度36℃、转速160rpm/min条件下，摇床培养24h，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液。

4.根据权利要求3所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述一级种子培养基为液体LB培养基，并且所述一级种子培养基的pH为7.0～8.0。

5.根据权利要求1所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液包括如下步骤：按1％接种量，将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基，在35℃～38℃，转速100rpm/min，通气量为1500L/h，罐压保持在0.04MPa～0.06MPa条件下培养24h，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液。

6.根据权利要求5所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述二级种子培养基包括以下质量分数计的组分：黄豆粉1.5‰，蔗糖3‰，蛋白胨2‰，玉米粉3‰，鱼粉2‰，硫酸铵0.4‰，硫酸镁0.3‰，磷酸二氢钾0.3‰，磷酸氢二钾0.03‰，硫酸锰0.02‰，余量为水，pH为7.0～8.0。

7.根据权利要求1所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液进行培养，得枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液包括如下步骤：按1％接种量，将枯草芽孢杆菌YWS-20-2072二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基，在35℃～38℃，转速110rpm/min，通气量为13m³/h、罐压保持在0.06MPa条件下培养46h～48h，培养后的发酵液中枯草芽孢杆菌YWS-20-2072的有效活菌数不小于1×10¹⁰cfu/ml时停止发酵，所得发酵液即为枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液。

8.根据权利要求7所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括以下质量分数计的组分：黄豆粉1.5‰，蔗糖3‰，蛋白胨2‰，玉米粉3‰，鱼粉2‰，硫酸铵0.4‰，硫酸镁0.3‰，磷酸二氢钾0.3‰，磷酸氢二钾0.03‰，硫酸锰0.02‰，余量为水，pH为7.0～8.0。

9.一种防治烟草青枯病的生物制剂，其特征在于，是采用权利要求1至8中任一项所述的防治烟草青枯病的生物制剂的制备方法制得的。

10.权利要求9所述的防治烟草青枯病的生物制剂在烟草种植中的应用，其特征在于，分别在烟草移栽期后7天和旺长期后7天，将防治烟草青枯病的生物制剂稀释后施加。