[发明专利]一种基因修饰的非人动物的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 202111658990.4 | 申请日： | 2021-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN113999873B | 公开（公告）日： | 2022-05-20 |
| 发明（设计）人： | 李国君;宁钧宇;敬海明;高珊;张楠;谭壮生;李子南;娄云;曾晓芃;董一文;黄蕤;赵磊;赵可 | 申请（专利权）人： | 北京市疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027;C12N15/12;C12N15/61;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京领科知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11690 | 代理人： | 徐丹丹;张丹 |
| 地址： | 100013 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 修饰 非人 动物 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，包括将外源核苷酸序列敲入Adgra3基因的启动子下游，且终止密码子之前，所述的外源核苷酸序列包含编码iCre-ERT2的核苷酸序列，所述编码iCre-ERT2的核苷酸序列与内源Adgra3基因通过GSG-P2A连接，所述GSG-P2A的氨基酸序列如SEQ ID NO：21所示,所述的外源核苷酸序列由非人动物Adgra3基因内源性调控元件调控，使得内源Adgra3与iCre-ERT2共表达，所述非人动物的脉络丛组织中表达Cre重组酶，所述的非人动物为大鼠；
所述的构建方法包括构建产生sgRNA的载体并获得sgRNA体外转录产物、构建包含外源核苷酸序列的打靶载体、将sgRNA体外转录产物和Cas9 mRNA以及打靶载体导入非人动物细胞，并进一步植入假孕母鼠的子宫，获得非人动物或其子代；其中，所述的sgRNA如SEQ IDNO：3所示，所述的打靶载体包含供体DNA序列、5’臂和3’臂；所述的供体DNA序列包含编码iCre-ERT2的核苷酸序列，所述的iCre-ERT2的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示，所述的5’臂如SEQ ID NO：19所示，所述的3’臂如SEQ ID NO：20所示。
2.权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的编码iCre-ERT2的核苷酸序列如SEQID NO：18所示。
3.权利要求1-2任一所述的构建方法获得的非人动物或其子代在构建基因编辑动物模型中的应用，或者在研究Adgra3基因在脉络丛中的表达情况的应用。
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