[发明专利]云实皮药物药代动力学和组织分布的动物模型构建方法

权利要求书

1.云实皮药物药代动力学和组织分布的动物模型构建方法，其特征在于，大鼠灌胃给予云实皮提取物药液后，在不同时间点采集血浆，通过测定标志性成分在大鼠血浆中的含量，得到云实皮药物大鼠体内的药代动力学参数；大鼠灌胃给予云实皮提取物药液后，经股动脉放血后取大鼠组织用于药代动力学分析，通过测定标志性成分在大鼠各组织中的含量，得到云实皮药物大鼠组织分布的药代动力学数据。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，大鼠血浆的采集时间分别为给药后0.083h、0.167h、0.33h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h，经大鼠尾静脉取血。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标志性成分为：原苏木素B-10-O-β-D-葡萄糖苷、原苏木素B、3-去氧苏木查尔酮和异甘草素。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)测试样品的制备

a.云实皮药液配制:取云实皮药材，加入乙醇提取，滤液减压浓缩，饱和正丁醇萃取，真空干燥，即得云实皮提取物；云实皮提取物加入羧甲基纤维素钠溶液，超声溶解并搅拌，即得药液；

b.大鼠血浆样品采集：取健康大鼠，单次给予所述药液，于给药后经尾静脉取血，即得含药大鼠血浆样品；

c.大鼠血浆样品处理：取所述步骤b中所得大鼠血浆样品，置EP管中，依次加甲酸水，葛根素内标溶液，甲醇，涡混，超声，离心，取上清液置于离心管中，氮气吹干；残留物用甲醇复溶，涡混，超声，离心，取上清液，即得含药大鼠血浆分析样品；

d.大鼠组织样品采集：取健康大鼠，灌胃给予所述药液，股动脉放血后，迅速取出组织，心、肝、脾、肺、肾、胃以及十二指肠，即得；

e.大鼠组织样品处理：取出步骤d中大鼠组织样品，制成匀浆；取各组织匀浆液，离心，取上层匀浆液，置EP管中，补加甲醇，加入甲酸水，涡混，加入葛根素内标溶液，再加入甲醇，涡混，超声，离心，取上清液置EP管中，吹干，甲醇复溶，涡混，超声，离心，取上清液，即得大鼠组织分析样品；

f.对照品溶液制备：称取原苏木素B-10-O-β-D-葡萄糖苷、原苏木素B、3-去氧苏木查尔酮和异甘草素对照品溶于甲醇中，获得储备液；分别量取4种对照品储备液，用甲醇梯度稀释至所需浓度，即得混合系列对照品溶液；

g.葛根素内标溶液：称取葛根素溶于甲醇中，即得葛根素内标储备液；取内标储备液，用甲醇定容，得葛根素内标溶液；

h.大鼠空白血浆样品：取大鼠空白血浆，加入混合对照品溶液，依照步骤c进行处理，即得大鼠空白血浆分析样品；

i.大鼠空白组织样品：将不给予药物的相应组织匀浆作为空白匀浆液；取各组织匀浆液，依照步骤e进行处理，即得大鼠空白组织分析样品；

(2)UPLC-MS/MS分析色谱条件和检测条件：Waters BEH C18色谱柱，保护柱：WatersVan Guard BEH C18，流速：0.30mL·min^-1，柱温：40℃，进样器的温度：25℃，进样体积为1μL；

(3)测定方法：将步骤(1)中所得含药大鼠血浆分析样品、大鼠组织分析样品；加入一定浓度对照品溶液和内标溶液的大鼠空白血浆分析样品和大鼠空白组织分析样品，注入UPLC-MS/MS，测定，即得。

5.根据权利要求4所述的方法，其中步骤d中，分别于给药后进行股动脉放血的时间分别为0.25h、0.5h、2h和6h四个时间点。

6.根据权利要求4所述的方法，其中步骤(2)中，质谱条件为采用电喷雾电离源，正、负模式同时扫描，毛细管电离电压：1.5kV，离子源温度：120℃；喷雾气与反吹气：N₂，去溶剂气流速：650L·hr^-1，去溶剂气温度：350℃，扫描方式为多反应选择离子监测，质谱数据采集及处理软件为Masslynx 4.1质谱工作站。