[发明专利]一种Ⅲ型胶原蛋白的融合蛋白、表达系统、药物组合物及应用

权利要求书

1.一种Ⅲ型胶原蛋白的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白：

（1）具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

（2）对SEQ ID NO.1所示的序列进行一个或多个氨基酸的添加、取代或缺失所形成的衍生多肽，所述衍生多肽与SEQ ID NO.1所示多肽具有相同或基本相同的功能；

（3）对（1）或（2）中所述多肽进行修饰后的衍生多肽。

2.如权利要求1所述Ⅲ型胶原蛋白的融合蛋白，其特征在于，所述“一个或多个氨基酸”是1-7个氨基酸，优先1-6个氨基酸；更为优选的，为 1-3个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽；

或，所述融合蛋白还包括通过化学或遗传修饰后获得衍生多肽，所述修饰方法包括采用聚乙二醇、链霉亲和素、生物素、放射性同位素、荧光剂、酶、细胞毒性物质或抗肿瘤剂进行修饰，还包括所述融合蛋白与功能性多肽连接后的衍生多肽，所述功能性基团包括但不限于靶向肽、穿膜肽，所述穿膜肽为H7R8、HIV-I TAT (48-60)、TAT (47-57)、TAT (48-57)、R9-Tat中的一种。

3.编码权利要求1或2所述Ⅲ型胶原蛋白融合蛋白的核苷酸序列；

优选的，所述核酸序列包括由于密码子简并性能够翻译得到权利要求1或2所述融合蛋白或衍生多肽的核酸序列；

优选的，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体中含有权利要求3所述的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述表达载体，其特征在于，所述编码核酸序列可插入所述表达载体；

所述表达载体为包括但不限于细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒或其他载体；

进一步的，所述表达载体为质粒载体，包括pBR型、pUC型、pBluescriptII型、pGEM型、pTZ型、pCL型或pET型；

具体的，所述表达载体为pET28a。

6.一种重组胶原蛋白表达的工程菌，其特征在于，所述工程菌表达权利要求1或2所述Ⅲ型胶原蛋白的融合蛋白。

7.如权利要求6所述重组胶原蛋白表达的工程菌，其特征在于，所述工程菌中包含权利要求4或5所述表达载体，或所述工程菌中整合了权利要求3所述的编码核酸；

优选的，所述工程菌为原核细胞或低等真核细胞；进一步的，为大肠杆菌(E .Coli) 、谷氨酸棒杆菌(Coryne bacterium glutamicum)、蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；更为优选的，所述菌株为大肠杆菌。

8.如权利要求6所述重组胶原蛋白表达的工程菌，其特征在于，所述工程菌为导入权利要求4或5所述表达载体的大肠杆菌，构建方法如下：

（1）重组表达载体的构建：将SEQ ID NO.2所示序列的目的基因插入到表达载体pET28a的酶切位点EcoR1和Not1之间，得到重组表达载体pET28a-III；

（2）转化体的构建：将重组表达载体pET28a-III转化入感受态细胞BL21(DE3)，筛选获得重组基因工程菌；

（3）诱导表达：将获得的重组基因工程菌接入抗性LB培养基中培养过夜，筛选生长转况良好的菌落接种至LB培养基中培养至对数生长中期，加入IPTG进行诱导表达；

（4）蛋白纯化：收集重组基因工程菌的培养菌液，通过亲和柱层次纯化获得目的融合蛋白。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物中包括权利要求1或2所述融合蛋白；

优选的，所述药物组合物中，还包括药学上所必需的载体。

10.权利要求1或2所述融合蛋白、权利要求9所述药物组合物在制备洗护用品或医疗器械中的应用；

优选的，所述洗护用品为包括但不限于衣物洗涤剂、个人卫生清洁剂、家庭日用洗涤剂或化妆品中的一种；

优选的，所述医疗器械包括药物输送和组织工程方面的应用：

所述药物输送的应用包括所述融合蛋白、药物组合物作为一种药物递送基质方面的应用，包括但不限于医用贴剂、创面敷料或生物补片；

在组织工程方面的应用包括用于制备组织替代材料，包括但不限于植入式生物支架材料、人工皮肤、人工血管或人工骨材料。