[发明专利]猪巴氏杆菌毒素亚单位疫苗

说明书

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及猪巴氏杆菌毒素亚单位疫苗。本发明提供了如SEQ ID NO:1所示的巴氏杆菌毒素的抗原片段，该片段为截短的巴氏杆菌毒素蛋白片段，其能够在大肠杆菌中高水平可溶性表达，表达产物不仅具有较高的收率，且具有良好的免疫原性能够起到良好的免疫效果。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及猪巴氏杆菌毒素亚单位疫苗。

背景技术

猪萎缩性鼻炎(Atrophic rhinitis of swine，AR)，是一种慢性传染病。本病的主要是支气管败血波氏杆菌的I相菌，其次是产毒素的多杀性巴氏杆菌(主要是D型)感染形成。前者单独感染时，鼻腔病变较轻，如果两者混合感染或继发感染时，则鼻腔病变很重。有时还可分离到绿脓杆菌、放线菌、毛滴虫及猪细胞巨化病毒。支气管败血波氏杆菌是小杆菌或球杆菌，革兰氏阴性，有两极着染的特点，有荚膜，能产生强坏死毒素。本菌的抵抗力不强，一般消毒药均可杀死。外表表现是以鼻甲骨(特别是下卷曲)萎缩、颜面部变形、慢性鼻炎为特征。

猪萎缩性鼻炎我国许多养猪业发达的省市也普遍存在，其发病率正在逐年升高，猪感染猪萎缩性鼻炎病原后，猪只的上呼吸道的正常结构和功能受到损害，导致机体对呼吸道病原的抵抗能力显著降低，使一些致病性强的呼吸道病原微生物容易感染受损伤的猪群，最终使猪群出现猪呼吸道综合征，猪的死亡率增加，严重危害猪群健康。

疫苗免疫是预防和控制PAR的主要手段，目前行业普遍流行的做法为巴氏杆菌分离培养后，采用规模扩大培养，然后使用灭活剂灭活后添加免疫佐剂使用的方案，但该方案总蛋白含量大，存在免疫应激，其次过多无效蛋白的引入导致免疫效果不佳；另有方案表达巴氏杆菌蛋白，但基因工程亚单位疫苗的开发中主要问题为目的蛋白的不可溶表达限制了基因工程疫苗的应用，包涵体蛋白不具备生物活性难以发挥免疫效应所以目前市面上此类疫苗基本没有或者为大量大白促成的疫苗，免疫效果差。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供高效可溶表达的猪巴氏杆菌毒素亚单位疫苗。

本发明提供了巴氏杆菌毒素的抗原片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供的巴氏杆菌毒素的抗原片段来源于生产分离株，更加贴近生产需求与生产毒株更为吻合，有利于后续免疫效果提升。通过对序列的截短表达，筛选出毒素蛋白中具备高效免疫原性的片段，提高生产效力。

本发明还提供了编码本发明所述抗原片段的核酸。

本发明所述核酸经密码子优化，具体实施例中，其核酸序列如SEQ ID NO:2所示。

通过密码子优化，本发明进一步提高了抗原片段的可溶性表达效率，为疫苗的产出提供重要材料。

本发明还提供了一种表达载体，其包括本发明所述的核酸。

本发明中，所述表达载体的骨架载体为pET系列载体，一些具体实施例中，所述的表达载体中骨架载体为pET-21a。本发明实施例中，所述表达载体中，核酸片段的插入位点为BamHI和XhoI之间。

本发明还提供了转化或转染所述表达载体的宿主。

一些实施例中，所述宿主为大肠杆菌。一些具体实施例中，本发明所述的宿主为大肠杆菌BL21(DE3)。

本发明所述宿主的构建方式包括将本发明所述的表达载体转化入宿主感受态细胞。

本发明抗原片段的制备方法，其包括培养本发明所述的的宿主，诱导表达获得含有所述抗原片段的表达产物。

在本发明具体实施例中，所述宿主为大肠杆菌，所述表达载体的骨架载体为pET-21a，所述诱导的诱导剂为IPTG。