[发明专利]FAM60A修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.FAM60A修饰的脂肪来源的间充质干细胞，其特征在于：其中，

脂肪来源的间充质干细胞为成人脂肪来源的间充质干细胞hAMSC时，FAM60A干预RNA为双链RNA组合，片段序列如SEQ:NO.1—SEQ:NO.8所示，包含hFAM60A mRNA的3’-UTR区400-2100范围内的4个短片段的反向互补序列：

SEQ:NO.1-2：

5’-CAAAGAAGUAUAUGCAUAGGAA-3’

3’-GUUUCUUCAUAUACGUAUCCUU-5’

SEQ:NO.3-4：

5’-AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCU-3’

3'-UCGAUACGGUCGUAGAACGGA-5’

SEQ:NO.5-6：

5’-GUACUGUAGCACUGUAAGCACUUUG-3’

3'-CAUGACAUCGUGACAUUCGUGAAAC-5’

SEQ:NO.7-8：

5’-AGUACAUCAUCUAUACUGUA-5’

3'-UCAUGUAGUAGAUAUGACAU-3’；

脂肪来源的间充质干细胞为小鼠脂肪来源的间充质干细胞mAMSC时，用于mAMSC-FAM60A构建的FAM60A干预RNA组合包含目的片段序列如SEQ:NO.1和SEQ:NO.9—SEQ:NO.14所示，其特征为包含mFAM60A mRNA的3’-UTR区的200-1800范围内的4个短片段的反向互补序列：

SEQ:NO.9-10：

5’-UAACCAAUGUGCAGACUACUGU-3’

3'-AUUGGUUACACGUCUGAUGACA-5’

SEQ:NO.11-12：

5’-GUACUGUACGUGACACAGCACUUUA-3’

3'-CAUGACAUGCACUGUGUCGUGAAAU-5’

SEQ:NO.13-14：

5’-AGUACAUCAUCUAUACUGUA-3’

3'-UCAUGUAGUAGAUAUGACAU-5’。

2.权利要求1所述的FAM60A修饰的间充质干细胞的修饰方法，其特征在于：采用干预脂肪来源的间充质干细胞中FAM60A蛋白水平的表观遗传学修饰方法。

3.根据权利要求2所述的修饰方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)第2代AMSC细胞接种于六孔板中，细胞融合度达30％-50％时进行转染；

2)配制转染试剂：取7.5μl Lipofectamine RNAiMAX稀释到142.5μl Opti-MEM^TM培养基中，轻轻混匀；

3)配制FAM60A干预RNA：在1.5ml EP管中加入144μl Opti-MEM^TM培养基和-20℃预冷的6μl FAM60A干预RNA 20μM；

4)将稀释好的FAM60A干预RNA与稀释好的转染试剂轻柔混合，在室温下孵育10分钟；取250μl孵育好的复合物，滴加到1750μl完全培养基中，同时混匀；

5)转染6h后换完全培养基，再继续培养42h，然后常规传代；

6)每2或3代重复上述步骤一次，获得AMSC-FAM60A。